【摘要】：研究背景:冠心病(Coronary Atherosclerotic Heart Disease,CHD)是由多個(gè)基因和環(huán)境因素長(zhǎng)期相互作用所致的復(fù)雜性疾病,嚴(yán)重威脅人類健康。在西方發(fā)達(dá)國(guó)家,其年死亡數(shù)可占總死亡人數(shù)的1/3左右,近30年來,我國(guó)CHD發(fā)病率和死亡率迅速增高,占心臟病死亡數(shù)的50%～75%。CHD是一種慢性炎癥性疾病,在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成中,單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)起著復(fù)雜而決定性的作用。另外,病變中富含淋巴細(xì)胞,提示炎癥和免疫應(yīng)答在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。此外,CHD具有家族聚集性,屬于遺傳性疾病。近幾年,在世界范圍內(nèi)運(yùn)用全基因組關(guān)聯(lián)研究的方法分析發(fā)現(xiàn)了一系列有關(guān)CHD的基因或變異,至2017年全世界醫(yī)學(xué)研究共發(fā)現(xiàn)六十多個(gè)CHD相關(guān)的易感基因,其中包括CXCL12、CCDC92、IL-6、MPO、TNF-α等免疫相關(guān)基因。TIM(T-cell immunoglobulin-and mucin-domain-containing molecule)基因家族是McIntire等人在2001年研究哮喘易感基因時(shí)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)影響T細(xì)胞分化的基因家族,與糖尿病、哮喘等多種免疫性疾病相關(guān)。人TIM家族包括3個(gè)成員TIM-1、TIM-3和TIM-4。TIM-1和TIM-3主要表達(dá)在Th細(xì)胞,而TIM-4主要表達(dá)在巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞表面,TIM-4是TIM-1的天然配體。近幾年的研究顯示,作為磷脂酰絲氨酸的受體,TIM-4可以通過與凋亡細(xì)胞表面的磷脂酰絲氨酸結(jié)合,促進(jìn)巨噬細(xì)胞等對(duì)凋亡細(xì)胞的吞噬。因此,TIM-4不僅能調(diào)節(jié)T細(xì)胞的增殖和活化,而且能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞的能力,進(jìn)而維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。研究發(fā)現(xiàn),TIM-4基因多態(tài)性與哮喘、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等多種疾病相關(guān),但TIM-4基因多態(tài)性與CHD之間的關(guān)系目前尚不清楚,國(guó)內(nèi)外的研究也鮮有報(bào)道,尚待進(jìn)一步的研究。目的:本課題以CHD及TIM-4基因?yàn)檠芯繉?duì)象,通過對(duì)比分析CHD患者及健康對(duì)照個(gè)體sTIM-4血清水平及TIM-4基因SNP之間的差異,分析TIM-4 SNP與CHD患者各臨床指標(biāo)的相關(guān)性,明確TIM-4與CHD易感性及疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系,為CHD的診斷、治療及預(yù)后評(píng)估提供新的候選靶點(diǎn)。方法:收集CHD患者組及健康對(duì)照組抗凝全血及血清,整理分析年齡、性別、吸煙、喝酒、血清脂質(zhì)水平等相關(guān)資料。1.利用TIANGEN全血基因組DNA提取試劑盒來提取外周血基因組DNA。2.根據(jù)rs 7700944和rs 6882076多態(tài)性位點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物,利用實(shí)時(shí)定量PCR的方法進(jìn)行基因分型,計(jì)算基因型和等位基因頻率。3.應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)健康對(duì)照組和CHD患者血清中sTIM-4的水平。4.統(tǒng)計(jì)分析健康對(duì)照組和CHD組rs 7700944和rs 6882076兩個(gè)位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率的差異,分析CHD患者組及健康對(duì)照組血清sTIM-4水平的差異、CHD中rs 7700944位點(diǎn)不同基因型的個(gè)體血清sTIM-4的水平差異,進(jìn)一步分析rs 7700944不同基因型與CHD患者高血壓、糖尿病及血脂和冠脈評(píng)分的關(guān)系。結(jié)果:1.CHD患者組與健康對(duì)照組比較,吸煙和喝酒的比例較高。在血脂代謝方面,CHD患者的甘油三酯(TG)比較高,高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)比較低,低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和總膽固醇(TC)之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.CHD患者組與健康對(duì)照組比較,rs 6882076位點(diǎn)基因型與等位基因頻率無顯著性差異,rs 7700944位點(diǎn)基因型和等位基因分布頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,TIM-4基因rs 7700944 AA純合型較不易患CHD。3.CHD患者血清中sTIM-4的表達(dá)水平較健康對(duì)照組明顯降低。相比其他基因型,rs 7700944 AA純合型的CHD患者中血清sTIM-4水平高于其他基因型的患者。4.CHD患者中,rs 7700944不同基因型在TC、TG、HDL-C、LDL-C無明顯差異。在冠脈Gensini評(píng)分中,AA基因型要高于GG型,而與GA型無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。5.CHD患者血清sTIM-4水平與甘油三酯呈正相關(guān),未發(fā)現(xiàn)與血脂其他指標(biāo)、Gensini評(píng)分的相關(guān)性,在AA基因型的CHD患者中也未發(fā)現(xiàn)sTIM-4與Gensini評(píng)分的相關(guān)性。在CHD中,未發(fā)現(xiàn)rs 7700944位點(diǎn)不同基因型與糖尿病和高血壓發(fā)病的相關(guān)性。結(jié)論:1.CHD患者外周血sTIM-4表達(dá)水平降低,提示sTIM-4可能有利于阻止CHD的發(fā)生。2.TIM-基因rs 6882076位點(diǎn)與CHD的發(fā)生無關(guān),rs 7700944位點(diǎn)與CHD的發(fā)生有關(guān),rs 7700944 AA純合型較不易患CHD。3.TIM4基因rs 7700944 AA純合型的CHD患者血清中sTIM-4的水平高于其他基因型的患者,但其Gensini評(píng)分高于GG型的患者,并且CHD患者血清sTIM-4與甘油三酯的水平呈正相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R541.4
【圖文】：

尸＝０．２２２）并無相關(guān)性，與冠脈Ｇｅｎｓｉｎｉ評(píng)分（Ｐ＝０．２２０）也沒有相關(guān)性，而逡逑與甘油三酯（ＴＧ，Ｐ＝０．０２３）正相關(guān)，隨著ｓＴＩＭ－４濃度的升高，甘油三酯輕度逡逑升高（圖１．２）。逡逑１９逡逑

ＱＰＣＲ擴(kuò)增后兩ＡＣＴ值相同或接近（根據(jù)實(shí)驗(yàn)兩者差值小于２，多數(shù)逡逑小于１），有單峰的熔解圖形和特定的熔解溫度，該標(biāo)本基因型為雜合型（如逡逑圖２．１）；野生型擴(kuò)增管ＡＣＴ值小于突變型擴(kuò)增管（據(jù)實(shí)驗(yàn)差值大于６，多數(shù)逡逑大于１０），有相近的熔解或不同的熔解溫度，該標(biāo)本基因型為野生純合型；相逡逑反基因型為突變純合型（如圖２．２）。逡逑Ｍｅｌｔ邋Ｃｕｒｖａ逡逑？？邐Ｉ逡逑ｒｔ邐邐邐邐邐一＾邐？逡逑圖２．１雜合型（具有相同的ＡＣＴ、熔解曲線和熔解溫度）逡逑Ｆｉｇ．２．１邋Ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ邋ｇｅｎｏｔｙｐｅ邋ｗｉｔｈ邋ｓａｍｅ邋ＣＴ邋ｖａｌｕｅ，邋ｍｅｌｔｉｎｇ邋ｃｕｒｖｅ邋ａｎｄ邋ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ逡逑ＭｅＳＣＨｒｖｅ逡逑Ｉ；＊邐，邋）邋ｗ逡逑圖２．２純合型（具有不同的ＡＣＴ、熔解曲線和熔解溫度）逡逑Ｆｉｇ．２．２邋Ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ邋ｇｅｎｏｔｙｐｅ邋ｗｉｔｈ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ＣＴ邋ｖａｌｕｅ，邋ｍｅｌｔｉｎｇ邋ｃｕｒｖｅ邋ａｎｄ逡逑ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ逡逑３６逡逑

ＱＰＣＲ擴(kuò)增后兩ＡＣＴ值相同或接近（根據(jù)實(shí)驗(yàn)兩者差值小于２，多數(shù)逡逑小于１），有單峰的熔解圖形和特定的熔解溫度，該標(biāo)本基因型為雜合型（如逡逑圖２．１）；野生型擴(kuò)增管ＡＣＴ值小于突變型擴(kuò)增管（據(jù)實(shí)驗(yàn)差值大于６，多數(shù)逡逑大于１０），有相近的熔解或不同的熔解溫度，該標(biāo)本基因型為野生純合型；相逡逑反基因型為突變純合型（如圖２．２）。逡逑Ｍｅｌｔ邋Ｃｕｒｖａ逡逑？？邐Ｉ逡逑ｒｔ邐邐邐邐邐一＾邐？逡逑圖２．１雜合型（具有相同的ＡＣＴ、熔解曲線和熔解溫度）逡逑Ｆｉｇ．２．１邋Ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｕｓ邋ｇｅｎｏｔｙｐｅ邋ｗｉｔｈ邋ｓａｍｅ邋ＣＴ邋ｖａｌｕｅ，邋ｍｅｌｔｉｎｇ邋ｃｕｒｖｅ邋ａｎｄ邋ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ逡逑ＭｅＳＣＨｒｖｅ逡逑Ｉ；＊邐，邋）邋ｗ逡逑圖２．２純合型（具有不同的ＡＣＴ、熔解曲線和熔解溫度）逡逑Ｆｉｇ．２．２邋Ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ邋ｇｅｎｏｔｙｐｅ邋ｗｉｔｈ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ＣＴ邋ｖａｌｕｅ，邋ｍｅｌｔｉｎｇ邋ｃｕｒｖｅ邋ａｎｄ逡逑ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ逡逑３６逡逑

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2744242