發(fā)布時(shí)間：2020-05-27 09:03

【摘要】：目的:研究Ecrg4(人食道癌相關(guān)基因-4)在正常心臟的分布和潛在的生理功能,以及其在心房顫動(dòng)患者和犬房顫模型中的表達(dá)情況,同時(shí)探討Ecrg4在心房顫動(dòng)中的作用及分子機(jī)理。方法:實(shí)驗(yàn)一:免疫組化及實(shí)時(shí)定量-PCR分析Ecrg4在心臟各部位表達(dá)情況:取9只SD大鼠的心臟,在顯微鏡下進(jìn)行解剖,分別獲取竇房結(jié)、房室結(jié)、左右心房、及左右心室組織,經(jīng)免疫組織化學(xué)染色,在顯微鏡下觀察Ecrg4在各解剖部位的表達(dá)情況,再將解剖好的各心肌組織進(jìn)行總RNA分離和實(shí)時(shí)定量-PCR,檢測(cè)Ecrg4在各心肌組織中的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)二:應(yīng)用免疫熒光標(biāo)記法檢測(cè)乳鼠心肌細(xì)胞中,Ecrg4分別在左右心房肌細(xì)胞及左右心室肌細(xì)胞的表達(dá)情況,并在熒光顯微鏡下觀察和拍片。實(shí)驗(yàn)三:將l3只犬隨機(jī)分為兩組,空白對(duì)照組5只,另外實(shí)驗(yàn)組8只運(yùn)用心房快速起搏方法建立犬房顫模型,取犬心肌組織標(biāo)本,免疫組化方法染色,并在顯微鏡下觀察Ecrg4在房顫犬及正常犬心肌組織的表達(dá)情況,再將心肌組織進(jìn)行總RNA分離和實(shí)時(shí)定量-PCR。實(shí)驗(yàn)四:分別獲取5名年齡性別相匹配的竇性心律患者和持續(xù)性心房顫動(dòng)患者的心耳組織,運(yùn)用免疫組化方法染色,在鏡下觀察Ecrg4在心房顫動(dòng)患者和竇性節(jié)律患者心耳中的表達(dá)情況并進(jìn)行對(duì)比。實(shí)驗(yàn)五:采取siRNA技術(shù)來(lái)敲低新生乳鼠心肌細(xì)胞Ecrg4基因表達(dá),并與野生型原代乳鼠的心肌細(xì)胞進(jìn)行比較,分析動(dòng)作電位時(shí)程,同時(shí)檢測(cè)與炎癥及心房重構(gòu)有關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)果:l.Ecrg4在心臟的左心房、竇房結(jié)里表達(dá)量最高,其次是右心房,而心室中的表達(dá)量較少,呈散發(fā)分布,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.心房肌細(xì)胞中檢測(cè)到的Ecrg4定位在核周和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)區(qū)域,擁有較強(qiáng)的Ecrg4陽(yáng)性免疫熒光信號(hào)(綠色),然而心室肌細(xì)胞里能夠發(fā)現(xiàn)Ecrg4定位在細(xì)胞質(zhì)區(qū)間,顯示微弱的均勻的免疫熒光(淡綠色)。3.與竇性心律的患者相比較,在持續(xù)性心房顫動(dòng)患者的心耳中,Ecrg4的表達(dá)顯著降低。4.同對(duì)照犬相比,快速起搏誘發(fā)犬房顫模型心房里,Ecrg4表達(dá)量顯著降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.當(dāng)敲低新生乳鼠心房肌細(xì)胞中的Ecrg4基因時(shí),與未敲低Ecrg4基因的心房肌細(xì)胞比較,發(fā)現(xiàn)心房肌細(xì)胞的動(dòng)作電位時(shí)程顯著縮短,同時(shí)發(fā)現(xiàn)敲低Ecrg4基因會(huì)顯著上調(diào)了促炎細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-l(IL-la)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)及單核細(xì)胞趨化蛋白-l(MCPl)的表達(dá)(P0.05),使基質(zhì)金屬蛋白酶-3(MMP3),重組人Sl00鈣結(jié)合蛋白al(sl00al)和重組人Sl00鈣結(jié)合蛋白a8(sl00a8)上調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),同時(shí)抑制了Gjal(縫隙通道蛋白-l)的表達(dá)(P0.05)。結(jié)論:l.Ecrg4在心房組織和心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)里的表達(dá)明顯高于心室組織。2.與竇性心律患者比較,持續(xù)性心房顫動(dòng)患者心耳組織中Ecrg4的表達(dá)量顯著降低。3.犬房顫模型里,與對(duì)照組相比較,心房里Ecrg4的表達(dá)量顯著降低。4.當(dāng)敲低初生乳鼠心房肌細(xì)胞里的Ecrg4基因后,與未敲低Ecrg4基因的心房肌細(xì)胞比較,顯著縮短了動(dòng)作電位的時(shí)程、同時(shí)能抑制Gjal的表達(dá)、并激活炎癥及心臟重塑相關(guān)基因的表達(dá)。
【圖文】：

圖 3Ecrg4 在乳鼠心肌細(xì)胞中表達(dá)圖像顯示相對(duì)較高水平的 Ecrg4（亮綠色）在乳鼠心內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（A，左圖）和相比較之下水平較低的 Ecrg4（淡胞的細(xì)胞質(zhì)（B， 右圖）。 比例尺= 50 微米

圖 4 在持續(xù)性心房顫動(dòng)患者的心耳中，Ecrg4 的表達(dá)5 例患有持續(xù)性房顫的患者（A，，左側(cè)標(biāo)記為 AFl-5），右側(cè)標(biāo)記為 SRl-5）右心耳標(biāo)本。心房顫動(dòng)患者的 細(xì)胞呈現(xiàn)淺棕色染色（低水平的 Ecrg4），而竇性心
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R541.75

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本文編號(hào)：2683295