【摘要】：目的:研究Ecrg4(人食道癌相關基因-4)在正常心臟的分布和潛在的生理功能,以及其在心房顫動患者和犬房顫模型中的表達情況,同時探討Ecrg4在心房顫動中的作用及分子機理。方法:實驗一:免疫組化及實時定量-PCR分析Ecrg4在心臟各部位表達情況:取9只SD大鼠的心臟,在顯微鏡下進行解剖,分別獲取竇房結、房室結、左右心房、及左右心室組織,經免疫組織化學染色,在顯微鏡下觀察Ecrg4在各解剖部位的表達情況,再將解剖好的各心肌組織進行總RNA分離和實時定量-PCR,檢測Ecrg4在各心肌組織中的表達量。實驗二:應用免疫熒光標記法檢測乳鼠心肌細胞中,Ecrg4分別在左右心房肌細胞及左右心室肌細胞的表達情況,并在熒光顯微鏡下觀察和拍片。實驗三:將l3只犬隨機分為兩組,空白對照組5只,另外實驗組8只運用心房快速起搏方法建立犬房顫模型,取犬心肌組織標本,免疫組化方法染色,并在顯微鏡下觀察Ecrg4在房顫犬及正常犬心肌組織的表達情況,再將心肌組織進行總RNA分離和實時定量-PCR。實驗四:分別獲取5名年齡性別相匹配的竇性心律患者和持續(xù)性心房顫動患者的心耳組織,運用免疫組化方法染色,在鏡下觀察Ecrg4在心房顫動患者和竇性節(jié)律患者心耳中的表達情況并進行對比。實驗五:采取siRNA技術來敲低新生乳鼠心肌細胞Ecrg4基因表達,并與野生型原代乳鼠的心肌細胞進行比較,分析動作電位時程,同時檢測與炎癥及心房重構有關基因的表達。結果:l.Ecrg4在心臟的左心房、竇房結里表達量最高,其次是右心房,而心室中的表達量較少,呈散發(fā)分布,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2.心房肌細胞中檢測到的Ecrg4定位在核周和內質網(ER)區(qū)域,擁有較強的Ecrg4陽性免疫熒光信號(綠色),然而心室肌細胞里能夠發(fā)現(xiàn)Ecrg4定位在細胞質區(qū)間,顯示微弱的均勻的免疫熒光(淡綠色)。3.與竇性心律的患者相比較,在持續(xù)性心房顫動患者的心耳中,Ecrg4的表達顯著降低。4.同對照犬相比,快速起搏誘發(fā)犬房顫模型心房里,Ecrg4表達量顯著降低,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5.當敲低新生乳鼠心房肌細胞中的Ecrg4基因時,與未敲低Ecrg4基因的心房肌細胞比較,發(fā)現(xiàn)心房肌細胞的動作電位時程顯著縮短,同時發(fā)現(xiàn)敲低Ecrg4基因會顯著上調了促炎細胞因子白細胞介素-l(IL-la)、白細胞介素-6(IL-6)及單核細胞趨化蛋白-l(MCPl)的表達(P0.05),使基質金屬蛋白酶-3(MMP3),重組人Sl00鈣結合蛋白al(sl00al)和重組人Sl00鈣結合蛋白a8(sl00a8)上調,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),同時抑制了Gjal(縫隙通道蛋白-l)的表達(P0.05)。結論:l.Ecrg4在心房組織和心臟傳導系統(tǒng)里的表達明顯高于心室組織。2.與竇性心律患者比較,持續(xù)性心房顫動患者心耳組織中Ecrg4的表達量顯著降低。3.犬房顫模型里,與對照組相比較,心房里Ecrg4的表達量顯著降低。4.當敲低初生乳鼠心房肌細胞里的Ecrg4基因后,與未敲低Ecrg4基因的心房肌細胞比較,顯著縮短了動作電位的時程、同時能抑制Gjal的表達、并激活炎癥及心臟重塑相關基因的表達。
【圖文】：

圖 3Ecrg4 在乳鼠心肌細胞中表達圖像顯示相對較高水平的 Ecrg4（亮綠色）在乳鼠心內質網（A，左圖）和相比較之下水平較低的 Ecrg4（淡胞的細胞質（B， 右圖）。 比例尺= 50 微米

圖 4 在持續(xù)性心房顫動患者的心耳中，Ecrg4 的表達5 例患有持續(xù)性房顫的患者（A，，左側標記為 AFl-5），右側標記為 SRl-5）右心耳標本。心房顫動患者的 細胞呈現(xiàn)淺棕色染色（低水平的 Ecrg4），而竇性心
【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R541.75

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本文編號：2683295