本文關(guān)鍵詞：抑郁模型大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元BDNF基因選擇性轉(zhuǎn)錄的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：抑郁癥(major depressive disorder,MDD)是一種以絕望感、缺乏快感、自殺傾向等為特征的常見(jiàn)精神障礙性疾病[1]。抑郁癥的發(fā)病率和復(fù)發(fā)率非常高,并且在全球呈現(xiàn)增加的趨勢(shì)。世界衛(wèi)生組織(WHO)的數(shù)據(jù)顯示,到2030年,抑郁癥在所有高負(fù)擔(dān)疾病中將居于首位[2]。所以,對(duì)抑郁癥發(fā)病機(jī)制以及臨床治療的研究將非常重要。除了抑郁癥的臨床研究,通過(guò)動(dòng)物模型也是研究抑郁的常見(jiàn)方法。研究抑郁的動(dòng)物模型有多種,如強(qiáng)迫游泳(forced swim test,FST)、習(xí)得性無(wú)助(learned helplessness,LH)和慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激模型(chronic unpredictable mild stress,CUMS)等模型[3]。但是,這些模型不能很好地模擬臨床抑郁的發(fā)生,而且有些模型制備過(guò)程復(fù)雜,因此,能制備出較為穩(wěn)定而簡(jiǎn)便易行的抑郁動(dòng)物模型有助于抑郁癥的神經(jīng)生物學(xué)研究。目前臨床認(rèn)為,抑郁癥主要由周?chē)钪袘?yīng)激性事件的長(zhǎng)期刺激,致使體內(nèi)糖皮質(zhì)激素持續(xù)增多,大腦中情緒相關(guān)回路中神經(jīng)遞質(zhì)失衡引起[4]。因此,直接慢性給予外源性糖皮質(zhì)激素可以模擬抑郁發(fā)生的病理生理過(guò)程,同時(shí)避開(kāi)其他物理性或心理性應(yīng)激模型的缺點(diǎn)。本研究采用慢性口服糖皮質(zhì)激素的方式制備大鼠抑郁模型,同時(shí)檢測(cè)動(dòng)物多種抑郁相關(guān)癥狀以證實(shí)模型的有效性和可靠性[3,5]。海馬在整個(gè)與情緒記憶有關(guān)的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)中有至關(guān)重要的作用[6],抑郁的發(fā)生伴隨著海馬神經(jīng)元萎縮、神經(jīng)突觸減少和神經(jīng)元數(shù)量的降低[7]。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)是與海馬神經(jīng)元再生修復(fù)有關(guān)的一種非常重要的蛋白質(zhì),它廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng),其中在海馬腦區(qū)尤其含量豐富[8]。研究表明,BDNF可以促進(jìn)神經(jīng)元再生與修復(fù),BDNF的變化與抑郁的發(fā)生密切相關(guān)[9]。當(dāng)抑郁發(fā)生時(shí),神經(jīng)元內(nèi)BDNF基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)以及BDNF介導(dǎo)的信號(hào)通路發(fā)生改變[10]。BDNF的基因表達(dá)是由多個(gè)特異性啟動(dòng)子控制。基因組包括9個(gè)5'-非編碼外顯子(I-IXA)和一個(gè)3'編碼的外顯子(IX),它們?cè)谌祟?lèi)和嚙齒動(dòng)物之間非常相似。不同啟動(dòng)子控制不同的5'-非編碼外顯子,然后將它們剪接到3'-外顯子并形成包含不同外顯子的BDNF mRNA轉(zhuǎn)錄本。因?yàn)橹挥型怙@子IX包含編碼區(qū),所有這些mrna會(huì)被翻譯成相同的一種bdnf蛋白[11]。包含不同外顯子的bdnfmrna表達(dá)在不同部位,或者隨著環(huán)境刺激的不同而變化。因此,不同的刺激導(dǎo)致包含不同外顯子的mrna表達(dá),而不同mrna的穩(wěn)定性和翻譯效能并不相同,并最終影響神經(jīng)元的bdnf蛋白水平和細(xì)胞功能[12]。因此,我們將研究在慢性長(zhǎng)期糖皮質(zhì)激素引起的抑郁動(dòng)物模型中,觀察海馬腦區(qū)神經(jīng)元bdnfmrna選擇性轉(zhuǎn)錄的改變,以及對(duì)bdnf蛋白質(zhì)表達(dá)的影響。目的:探索制備理想的抑郁大鼠模型,為抑郁癥的病因?qū)W研究和治療提供更方便高效的動(dòng)物模型。同時(shí)觀察抑郁模型大鼠海馬bdnf蛋白表達(dá)和bdnfmrna選擇性轉(zhuǎn)錄的變化。方法:30只sd雄性大鼠(3組,10只/組),2只/籠,所有大鼠置于12小時(shí)晝夜循環(huán)的條件下飼養(yǎng),自由攝食飲水,適應(yīng)環(huán)境5天。然后口服給予皮質(zhì)酮(corticosterone,cort)3周,高劑量模型組給藥濃度為100μg/ml,低劑量模型組給藥濃度為25μg/ml,連續(xù)給藥14天,第15天cort濃度降為原來(lái)的50%,第18天降為原來(lái)的25%。觀察體重變化,通過(guò)elisa測(cè)定大鼠每周血清中cort的變化,通過(guò)觀察給藥前后大鼠在強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、敞箱實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)和糖水偏好實(shí)驗(yàn)中的各項(xiàng)指標(biāo)評(píng),價(jià)抑郁模型制備的效果。模型制備成功之后,各組隨機(jī)選取五只大鼠進(jìn)行免疫組化實(shí)驗(yàn)定位及并分析大鼠海馬各區(qū)的bdnf表達(dá)量。然后提取另外五只大鼠海馬組織,分ca1區(qū)、ca3區(qū)和dg區(qū)進(jìn)行pcr及qpcr實(shí)驗(yàn)分析,觀察大鼠海馬各區(qū)bdnf不同mrna轉(zhuǎn)錄本表達(dá)量的變化。結(jié)果:在抑郁模型制備中,cort組(100μg/ml,25μg/ml)各10只,對(duì)照組10只,共30只大鼠全部進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析。1.elisa結(jié)果表明大鼠在給藥1周后血清中cort濃度升高并持續(xù)3周。2.強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中,CORT組在給藥后漂浮時(shí)間上延長(zhǎng),與給藥前和對(duì)照組相比有明顯差異(P0.05),對(duì)照組內(nèi)無(wú)差異。3.敞箱試驗(yàn)中,CORT組在給藥后大鼠站立次數(shù)減少、水平運(yùn)動(dòng)總距離縮短、大鼠在角落的時(shí)間延長(zhǎng)、大鼠在中心的時(shí)間縮短,與給藥前和對(duì)照組相比有明顯差異(P0.05),而對(duì)照組內(nèi)無(wú)差異。4.高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中,CORT組在開(kāi)臂的時(shí)間縮短,在閉臂的時(shí)間延長(zhǎng),與給藥前和對(duì)照組相比有明顯差異(P0.05),對(duì)照組內(nèi)無(wú)差異。5.糖水偏好實(shí)驗(yàn)中,CORT組對(duì)糖水的偏愛(ài)度在給藥后有明顯降低,與給藥前和對(duì)照組相比有明顯差異(P0.05),對(duì)照組內(nèi)無(wú)差異。6.CORT組體重增長(zhǎng)值明顯低于正常組(P0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。7.免疫組化結(jié)果顯示:抑郁大鼠海馬腦區(qū)BDNF表達(dá)量降低,尤其是DG區(qū)。8.QPCR結(jié)果顯示,CORT組與對(duì)照組相比,BDNF mRNA IIa和III在DG區(qū)與CA1區(qū)的表達(dá)量降低(P0.05),而CA3區(qū)無(wú)變化;BDNF mRNA VI在DG區(qū)的表達(dá)量降低(P0.05),CA1以及CA3區(qū)的表達(dá)量無(wú)差異;BDNF mRNA VII在CA3以及DG區(qū)的表達(dá)量降低(P0.05),而CA1區(qū)的表達(dá)量無(wú)變化;BDNF mRNA VIII在DG區(qū)的表達(dá)量降低(P0.05),而CA1與CA3區(qū)的表達(dá)量無(wú)差異。結(jié)論:(1)連續(xù)口服糖皮質(zhì)激素的方法可以制備出較為理想的抑郁大鼠模型。(2)抑郁大鼠海馬腦區(qū),特別是DG區(qū)BDNF mRNA IIa,BDNF mRNA III,BDNF mRNA VI,BDNF mRNA VII,BDNF m RNA VIII轉(zhuǎn)錄本表達(dá)降低。
【關(guān)鍵詞】：抑郁癥 腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子 選擇性轉(zhuǎn)錄 皮質(zhì)酮 大鼠海馬
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R749.4;R-332
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 抑郁大鼠模型的制備與評(píng)估15-29
• 1 材料與方法15-22
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 1.2 儀器與試劑15-17
• 1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)17
• 1.4 口服糖皮質(zhì)激素制備抑郁大鼠模型17-18
• 1.5 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)18
• 1.6 敞箱實(shí)驗(yàn)18-19
• 1.7 高架十字迷宮19
• 1.8 糖水偏好實(shí)驗(yàn)19-20
• 1.9 體重測(cè)量20
• 1.10 大鼠斷尾采血20
• 1.11 ELISA檢測(cè)20-22
• 2 結(jié)果22-27
• 2.1 強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)22
• 2.2 敞箱實(shí)驗(yàn)22-24
• 2.3 高架十字迷宮24
• 2.4 糖水偏好實(shí)驗(yàn)24-25
• 2.5 體重測(cè)量25-26
• 2.6 ELISA檢測(cè)26-27
• 3 討論27-28
• 4 結(jié)論28-29
• 第二部分 抑郁模型大鼠海馬腦區(qū)BDNF mRNA選擇性轉(zhuǎn)錄的變化29-43
• 1 材料與方法29-38
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物29
• 1.2 儀器與試劑29-32
• 1.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)32-33
• 1.4 免疫組化33-34
• 1.5 PCR34-36
• 1.6 熒光定量PCR36-38
• 2 結(jié)果38-41
• 2.1 免疫組化檢測(cè)38-39
• 2.2 PCR39-40
• 2.3 熒光定量PCR40-41
• 3 討論41-42
• 4 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 綜述45-54
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 致謝54-55
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果55
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷55

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3 肖柳英,林培英,馮昭明,張丹;不同周齡的SD大鼠生理、生化及體重的正常值測(cè)定[J];中藥新藥與臨床藥理;1996年03期

4 李淑云;簡(jiǎn)易大鼠灌胃器的制作[J];錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2001年04期

5 楊明智,陳積圣;一種大鼠抓取與固定的新工具介紹[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2001年03期

6 戴英,陸群;復(fù)方H_(505)對(duì)Wistar大鼠外周血的血液流變學(xué)指標(biāo)的影響[J];中國(guó)血液流變學(xué)雜志;2001年01期

7 韋應(yīng)波,孫喜慶,曹新生,姚永杰,馮岱雅,楊長(zhǎng)斌;+Gz暴露時(shí)間對(duì)大鼠記憶功能和行為的影響[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2003年01期

8 呂學(xué)軍,郭俊生,李敏,周利梅,張永娟;暈船大鼠體內(nèi)鐵含量的變化[J];中國(guó)職業(yè)醫(yī)學(xué);2003年04期

9 湯仁仙,王迎偉,王慧,周峰;201A中藥合劑對(duì)大鼠抗腎小球基底膜腎炎病變的影響[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年06期

10 孫同柱,付小兵,翁立新,梁雪梅,陳偉;介紹一種簡(jiǎn)易的大鼠保定方法[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2004年01期

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1 尹音;孫振宇;胡敏;李冬霞;;持續(xù)性高正加速度對(duì)大鼠顳頜關(guān)節(jié)損傷的作用[A];第八屆全國(guó)顳下頜關(guān)節(jié)病學(xué)及（牙合）學(xué)大會(huì)論文匯編[C];2011年

2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;

本文編號(hào)：263256