【摘要】：研究背景:Howel-Evans綜合癥,又稱為掌跖角化病合并食管癌(tylosis with oesophageal cancer,TOC),是一種常染色體顯性遺傳病,以手足掌跖部位的皮膚局部增厚為特征,并且一生中發(fā)生食管鱗狀細胞癌的風險較高。在一個大的家系中,65歲及以上年齡的患者患食管鱗癌的概率為95%。目前該病在人群中的患病率低于百萬分之一�；颊呖沙霈F(xiàn)掌跖部位角化,口腔粘膜白斑,以及食管黏膜小的(2~5毫米)、白色的、點狀多倍體病變。食管癌的癥狀主要包括吞咽困難,食欲不振,厭食和體重減輕,但在疾病早期并沒有明顯的癥狀,因此提出早發(fā)現(xiàn)早診斷的重要性。與掌跖角化病相關(guān)的食管癌通常在中到晚年(55歲以后)出現(xiàn),進展不早于散發(fā)的食管鱗狀細胞癌。該病皮膚特征完全外顯,通常在7~8歲時出現(xiàn),最晚青春期時會開始表現(xiàn)出來。截至目前為止,國外有報道發(fā)現(xiàn)該病致病基因位于17q25.1上的RHBDF2基因,診斷為掌跖角化病合并食管癌。RHBDF2(Rhomboid family member 2)基因可以編碼非活性菱形蛋白2(inactive rhomboid-like protein2,i Rhom2),這種蛋白可以對表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)的脫落起作用。RHBDF2基因突變可能使IRHOM2蛋白的結(jié)構(gòu)及定位發(fā)生變化,進而使EGFR信號通路發(fā)生異常改變,從而導(dǎo)致了食管癌的發(fā)生。本病以陽性家族病史為基礎(chǔ),臨床特征包括皮膚掌跖部位增厚角化,食管損傷,以及RHBDF2基因突變的遺傳學(xué)分析。本研究旨在找到該病中國患病家系位于RHBDF2基因上的突變位點,檢測iRhom2蛋白在患者足底及食管黏膜組織中的表達變化。實驗材料與方法:1、研究對象:中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院皮膚科門診收集1個該病家系,來自于遼寧省,包括4代人,21個家系成員,其中11人為確診患該病患者,無近親結(jié)婚史,妊娠史正常,完善臨床檢查。經(jīng)患者和家屬知情同意后,采集家系成員血樣,足底及食管黏膜組織樣本,樣本保存于-80℃超低溫冰箱。2、實驗材料:EDTA、無水乙醇、瓊脂糖、蛋白酶K、5×TBE電泳緩沖液、GoldviewⅠ、DL2000 DNA Marker、PCR相關(guān)試劑等。3、實驗方法:(1)采集家系成員血樣,提取DNA,對RHBDF2基因的19個外顯子進行聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)擴增,從而獲取目標靶基因。(2)對目標靶基因進行直接測序,將擴增序列進行分析,與正常人類及人類基因組庫的基因進行對比,從而找出基因突變的靶點。(3)iRhom2蛋白表達分析:利用免疫熒光和免疫組化分析iRhom2蛋白分別在患者足底及食管粘膜組織中的表達變化情況。實驗結(jié)果:1、候選致病基因RHBDF2基因外顯子PCR擴增及基因組DNA測序:通過DNA直接測序法證實該家系RHBDF2基因第6號外顯子檢測出一個錯義突變位點,位于cDNA第589位的堿基,該處堿基由胞嘧啶變成腺嘌呤,即c.589CA(p.R197S)。2、iRhom2蛋白表達分析:免疫組化實驗結(jié)果表明iRhom2蛋白在該病患者食管黏膜細胞質(zhì)中高表達。免疫熒光結(jié)果表明iRhom2蛋白在足底組織細胞質(zhì)和細胞膜中均有表達,在正常人以細胞膜表達為主,而在患者中以細胞質(zhì)表達為主,二者的亞細胞定位有明顯差異。結(jié)論:1、該家系致病基因突變可能是RHBDF2雜合錯義突變c.589CA(p.R197S),且為國內(nèi)外首次報道的新突變。2、該家系患者足底部位的iRhom2蛋白定位發(fā)生變化,由以細胞膜分布為主改變?yōu)榧毎|(zhì)分布為主。該家系患者食管黏膜部位細胞內(nèi)iRhom2蛋白高表達。
【圖文】：

圖2.1 TOC家系系譜圖圖示：圓圈代表女性，方框代表男性，所有的實心圖案均為患者，所有的空心圖案均為正常人，所有的斜杠表示此人已離世，箭頭標識的患者為先證者。

圖示：圓圈代表女性，方框代表男性，，所有的實心圖案均為患者，所有的空心圖案均為正常人，所有的斜杠表示此人已離世，箭頭標識的患者為先證者。圖2.2 先證者足跖皮膚彌漫性角化伴鱗屑
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R758.53;R735.1

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本文編號：2594035