【摘要】：高尿酸血癥(hyperuricemia,HUA)是以尿酸(uric acid,UA)升高為主要特征的一組疾病,不僅引起痛風,而且有研究表明HUA可能是胰島素抵抗、血脂異常、高血壓、脂肪肝、慢性腎病等多種代謝相關性疾病和心血管疾病發(fā)生發(fā)展的獨立危險因素;且血清尿酸(serum uric acid,SUA)升高伴發(fā)的相關危害程度的廣泛性,已經(jīng)成為威脅全人類生活質(zhì)量的一大健康隱患,對于HUA的防治和基礎研究已成為熱點之一。目前研究顯示,致HUA的主要原因是,UA排泄減少;UA是人體內(nèi)嘌呤代謝的終產(chǎn)物,在正常狀態(tài)下,體內(nèi)2/3的UA經(jīng)腎臟排泄,約1/3的UA經(jīng)腸道排泄。但是由于UA自身有限的水溶性,使其在通過腎臟的排泄時易引起泌尿系尿酸性結(jié)石;且目前臨床上,治療HUA和痛風的藥物副作用極大;增加腸道的尿酸排泄量,為人類降低SUA提供了新的思路。尿酸酶能催化UA分解為CO_2、H_2O_2和尿囊素,而人類尿酸酶基因在進化過程中存在無義突變,機體缺乏該酶,使人體內(nèi)UA不能進一步氧化分解,在某些病理情況下,由于嘌呤代謝紊亂,血液中UA積累過多,會導致HUA,繼而引發(fā)痛風。本實驗擬構(gòu)建攜帶尿酸酶基因的工程菌株,并在尿酸酶N端引入信號肽使其在細胞外進行表達,加速腸道UA的分解,發(fā)揮降UA作用;同時建立不同類型的HUA大鼠模型,為后續(xù)工程菌株的應用奠定基礎。1.構(gòu)建重組尿酸酶表達菌株。以本實驗保存載體(攜帶尿酸酶基因)為模板,PCR擴增suox(SPA信號肽+尿酸酶編碼基因),并將其克隆至pMG36e(大腸桿菌-乳酸菌的穿梭載體)中,即pMG36e-suox。同時合成spo(乳酸菌信號肽)將其與uox(尿酸酶基因)連接后克隆至pMG36e中,即pMG36e-spo-uox。測序鑒定兩種載體。測序結(jié)果與GenBank查詢結(jié)果一致。2.重組尿酸酶的表達。將測序正確的含pMG36e-spo-uox、pMG36e-suox的BL菌株,擴大培養(yǎng)后,分別檢測兩表達載體于不同時間點在周質(zhì)空間、上清液及包涵體蛋白表達量。結(jié)果pMG36e-spo-uox、pMG36e-suox成功在細胞外表達,且在9h獲得最大表達量。3.單純果糖喂養(yǎng)和氧嗪酸鉀聯(lián)合果糖建立高尿酸血癥大鼠模型的比較研究。利用隨機數(shù)字表法,將60只雄性SD大鼠平均分為6組,即5%Fru組(單用5%濃度的果糖喂養(yǎng))、5%FPO組(用5%果糖+氧嗪酸鉀處理)、10%Fru(單用10%果糖喂養(yǎng))、10%FPO組(10%果糖水+氧嗪酸鉀處理)、PO組(單用氧嗪酸鉀處理)、Con組(空白對照組,單用清水飼喂);實驗建模14w;每周檢測大鼠SUA、血清尿素氮(serum urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum Creatinine,SCr)水平,并在實驗結(jié)束后,采集大鼠肝腎組織,觀察其組織學變化情況。結(jié)果在較短時間內(nèi),5%Fru組、10%FPO組、10%FPO組均能迅速升高SUA(P0.01);10%Fru組SUA水平不穩(wěn)定,在第10w、11w SUA水平明顯下降,顯著低于5%FPO組、10%FPO組(P0.01)。在第6w,10%果糖處理組BUN水平開始升高(P0.01),在第7w SCr水平開始升高(P0.01)。10%果糖處理組可見腎臟組織學改變,5%FPO組偶見輕微腎臟組織學改變,其余各組未見腎臟組織學改變;未見各組大鼠肝臟有明顯組織學變化。果糖聯(lián)合氧嗪酸鉀能夠快速建立穩(wěn)定的HUA大鼠模型,不同濃度果糖對腎臟改變狀態(tài)不同,根據(jù)后續(xù)研究需要選擇相應的模型。
【圖文】：

uoxPCR反應結(jié)果

suoxPCR反應結(jié)果
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R589.7

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 劉永貴;趙麗嘉;崔艷麗;賀星;沈雪硯;陳常青;;抗高尿酸血癥藥物研究進展[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2015年03期

2 李麗玉;林志健;張冰;吳君德;王紅坡;王雪潔;牛紅娟;朱春勝;;連續(xù)高果糖飲水對大鼠尿酸水平的影響及其病理機制[J];中華臨床營養(yǎng)雜志;2014年06期

相關碩士學位論文 前1條

1 黃勇;大腸桿菌錳超氧化物歧化酶基因的克隆和在保加利亞乳桿菌中的表達[D];重慶醫(yī)科大學;2003年

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本文編號：2592488