發(fā)布時(shí)間：2020-03-18 06:28

【摘要】：解淀粉芽孢桿菌PEBA20是從植物中分離到的內(nèi)生細(xì)菌,對多種植物病原真菌和細(xì)菌具有良好生防活性。變異株SCEV是PEBA20在單一環(huán)境持續(xù)繼代培養(yǎng)得到的可穩(wěn)定遺傳的表型變異株,其生物膜表型、運(yùn)動性特征以及抗菌活性都發(fā)生了明顯變化。本研究對變異株SCEV和PEBA20野生株進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序分析,并利用同源重組法構(gòu)建了△cheA突變株。主要研究結(jié)果如下:(1)通過RNA-seq得到大約2.4G數(shù)據(jù),WT(野生株)和SCEV中分別有3825和3757個(gè)表達(dá)基因,共有2339個(gè)表達(dá)差異基因。通過KEGG富集發(fā)現(xiàn)TCA循環(huán)路徑中存在大量基因表達(dá)差異;芽孢形成和休眠調(diào)控路徑中,SCEV芽孢外殼蛋白和孢子萌發(fā)調(diào)控蛋白相關(guān)基因表達(dá)顯著下調(diào),啟動芽孢形成級聯(lián)反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控因子spo0A、kinA、sigD和sigF顯著上調(diào);SCEV抗菌化合物合成的非核糖體肽及聚酮類合成路徑的基因全部上調(diào);分析與細(xì)菌群體感應(yīng)相關(guān)的基因中,22個(gè)上調(diào)表達(dá)基因和12個(gè)下調(diào)表達(dá)基因,趨化性和鞭毛組裝調(diào)控路徑中,SCEV共34個(gè)表達(dá)差異基因上調(diào)。這些基因表達(dá)差異,暗示著SCEV在芽孢形成、抗菌活性、運(yùn)動特征上可能存在差異。(2)測定了WT和SCEV運(yùn)動性的差異,在0.3%LB平板上測定細(xì)菌的趨化運(yùn)動能力,發(fā)現(xiàn)WT的趨化運(yùn)動能力強(qiáng)于SCEV;在0.7%LB平板上測定細(xì)菌的群集運(yùn)動特征,發(fā)現(xiàn)WT表現(xiàn)出明顯的群集運(yùn)動特征,而SCEV幾乎不產(chǎn)生群集運(yùn)動。通過同源重組技術(shù)構(gòu)建了PEBA20的che A基因突變株。通過PCR擴(kuò)增cheA基因同源前臂、同源后臂和kan抗性基因片段,連接到pMUTIN4自殺載體。通過電轉(zhuǎn)化分別轉(zhuǎn)入PEBA20感受態(tài)細(xì)胞并通過抗生素篩選獲得了cheA基因突變株�！鱟heA突變株在固氣界面不能形成復(fù)雜的生物膜表型,生物膜表面平坦、光滑,中部塌陷,邊緣略隆起且呈半透明狀。在氣液界面,△cheA突變株不能形成漂浮生物膜。在0.7%LB和0.3%LB平板上,△cheA突變株喪失了群集運(yùn)動性和趨化運(yùn)動性。
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S476

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 杜麗華;張維瑞;袁王俊;;解淀粉芽孢桿菌次生代謝產(chǎn)物的研究進(jìn)展[J];科技資訊;2018年06期

2 張雪;談詩謠;錢斯日古楞;王紅英;;一株解淀粉芽孢桿菌的特性及抑菌活性研究[J];中國畜牧獸醫(yī);2018年05期

3 張穎;曾艷;張麗姣;郁鵬;孫媛霞;;解淀粉芽孢桿菌果聚糖的化學(xué)修飾與抗氧化、抗腫瘤活性研究[J];食品工業(yè)科技;2016年13期

4 楊柳;袁文;劉迎;;抗嗜水氣單胞菌解淀粉芽孢桿菌的抗菌機(jī)理研究及其微膠囊制劑的安全性評價(jià)[J];食品界;2017年06期

5 歐陽靜;;中國首次給解淀粉芽孢桿菌頒發(fā)“執(zhí)照”[J];農(nóng)藥市場信息;2013年19期

6 ;激素和活性多肽[J];生物技術(shù)通報(bào);1988年09期

7 胡聰;李仲玄;斯大勇;張日俊;;解淀粉芽孢桿菌在畜禽養(yǎng)殖中的應(yīng)用[J];飼料工業(yè);2018年06期

8 李祥英;張英華;胥麗娜;馬夙靜;王大海;管恩森;楊德廉;劉振宇;;解淀粉芽孢桿菌對煙草葉片光合特性的影響[J];山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2018年03期

9 王繼華;徐世強(qiáng);張木清;;解淀粉芽孢桿菌的研究進(jìn)展[J];亞熱帶農(nóng)業(yè)研究;2017年03期

10 劉爽;劉俏;楊光;任劍奇;馬香艷;;復(fù)合解淀粉芽孢桿菌培養(yǎng)基優(yōu)化及抑菌活性的預(yù)測[J];計(jì)算機(jī)與應(yīng)用化學(xué);2015年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 劉振宇;曹陽;鄧德法;于占翠;尹向田;范素素;徐亮;胥麗娜;;解淀粉芽孢桿菌生物膜特征與生防活性[A];中國植物病理學(xué)會2012年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2012年

2 馬桂珍;葛平華;付泓潤;暴增海;王淑芳;;一株海洋解淀粉芽孢桿菌的分離鑒定及其抗真菌作用[A];江蘇省植物病理學(xué)會第十二次會員代表大會暨學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2013年

3 梁艷瓊;黃興;吳偉懷;李銳;鄭金龍;習(xí)金根;賀春萍;易克賢;;解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)TWC2搖瓶發(fā)酵條件優(yōu)化[A];中國植物病理學(xué)會2017年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2017年

4 葉景文;謝晚彬;李華平;;解淀粉芽孢桿菌與香蕉枯萎病菌互作中基因表達(dá)分析[A];中國植物病理學(xué)會2016年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2016年

5 尹向田;曹陽;齊文靜;范素素;劉振宇;;楊樹內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌yqxM-sipW-tas A操縱子的克隆[A];第三屆中國森林保護(hù)學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2010年

6 王爽;韓文瑜;雷連成;;大腸桿菌噬菌體裂解酶與解淀粉芽孢桿菌噬菌體裂解酶的特異結(jié)合區(qū)的融合表達(dá)及其裂解特征[A];第六屆中國獸藥大會論文集[C];2016年

7 王慧;黃火清;羅會穎;姚斌;;解淀粉芽孢桿菌高效表達(dá)系統(tǒng)的建立及其應(yīng)用研究[A];第十一屆中國酶工程學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2017年

8 邱思鑫;郭龍濤;;植物內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌TB2的中試與應(yīng)用[A];中國植物病理學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2010年

9 高偉霞;張偉;馮俊;王淑芳;宋存江;;解淀粉芽孢桿菌(Bacillus.amyloliquefaciens)LL3谷氨酸降解酶pgdS的敲除[A];2012年第五屆全國微生物遺傳學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文摘要集[C];2012年

10 張淑梅;;內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌抗菌活性物質(zhì)和抗菌蛋白基因研究[A];第四屆全國微生物資源學(xué)術(shù)暨國家微生物資源平臺運(yùn)行服務(wù)研討會論文集[C];2012年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前1條

1 特派記者 周海霞;我州科洽會簽約總額達(dá)2.6億元[N];巴音郭楞日報(bào)(漢);2015年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 廖瑜玲;解淀粉芽孢桿菌轉(zhuǎn)錄組學(xué)及其表達(dá)元件的挖掘與應(yīng)用[D];華南理工大學(xué);2016年

2 曹廣添;解淀粉芽孢桿菌的抑菌機(jī)理及對肉雞生長代謝和盲腸微生物菌群的影響[D];浙江大學(xué);2015年

3 吳黎明;解淀粉芽孢桿菌FZB42生防功能及環(huán)二肽激發(fā)子功能研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 邵佳慧;解淀粉芽孢桿菌SQR9吲哚乙酸合成途徑及促生效應(yīng)的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 楊揚(yáng);解淀粉芽孢桿菌B3生防相關(guān)基因以及一個(gè)環(huán)狀雙肽合成酶的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

6 陳淋;解淀粉芽孢桿菌SQR9增強(qiáng)植物耐鹽能力的機(jī)制研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 劉俊;解淀粉芽孢桿菌C06防治桃褐腐病菌的機(jī)制及其產(chǎn)生的γ-多聚谷氨酸在定殖中的作用[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

8 計(jì)堅(jiān);解淀粉芽孢桿菌SC06介導(dǎo)豬腸道免疫機(jī)理的研究[D];浙江大學(xué);2013年

9 曹海鵬;抗嗜水氣單胞菌解淀粉芽孢桿菌的抗菌機(jī)理研究及其微膠囊制劑的安全性評價(jià)[D];上海海洋大學(xué);2013年

10 楊慧林;基于全基因組測序和系統(tǒng)生物學(xué)分析的鳥苷工業(yè)生產(chǎn)菌分子育種研究[D];華南理工大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 萬婷婷;解淀粉芽孢桿菌SN16-1對番茄根際細(xì)菌群落的影響及其生防機(jī)制初步探討[D];華東理工大學(xué);2017年

2 孔維建;解淀粉芽孢桿菌PEBA20野生株與變異株SCEV轉(zhuǎn)錄組分析及cheA基因突變株構(gòu)建[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

3 那旭雯;轉(zhuǎn)化右旋磷霉素菌株的誘變及培養(yǎng)條件優(yōu)化[D];沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

4 張金鳳;棉花內(nèi)生解淀粉芽孢桿菌41B-1R應(yīng)用研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

5 孫娟娟;普魯蘭酶在解淀粉芽孢桿菌中表達(dá)方法的探索[D];江南大學(xué);2011年

6 朱博;解淀粉芽孢桿菌對仔豬生長性能、抗氧化能力、免疫功能和腸道菌群的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 楊敏馨;解淀粉芽孢桿菌替代飼用抗生素在肉雞上的應(yīng)用效果研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

8 柴海云;解淀粉芽孢桿菌纖溶酶的發(fā)酵優(yōu)化、酶學(xué)性質(zhì)及其基因的表達(dá)[D];華南理工大學(xué);2013年

9 樊蘇恒;核桃根腐病拮抗解淀粉芽孢桿菌發(fā)酵優(yōu)化及其菌劑的研制[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 趙榮彬;解淀粉芽孢桿菌與其誘變菌株酶系分析和蛋白酶基因克隆表達(dá)[D];南昌大學(xué);2017年

，

本文編號：2588360