【摘要】：為研究細胞色素CYP2基因在中華絨螯蟹蛻皮及生長發(fā)育中的作用,本試驗通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式RT-PCR反應以及cDNA末端快速擴增RACE技術獲得了中華絨螯蟹CYP2基因cDNA全長。用實時熒光定量PCR技術,分析該基因在中華絨螯蟹蛻皮過程中各組織的相對表達量。試驗結果顯示,中華絨螯蟹CYP2的cDNA全長1772bp,編碼491個氨基酸序列,包括一個84bp的5′端非編碼區(qū),一個212bp的3′端非編碼區(qū)、一個1475bp的開放閱讀框,經(jīng)BLAST比對,該核苷酸序列與岸蟹、三疣梭子蟹的相似性分別為66%、64%。實時熒光定量PCR結果顯示,中華絨螯蟹蛻皮前,CYP2基因在鰓中的表達量相對最高;在肝胰臟、肌肉中表達量略低于鰓;在Y器官、眼柄、胸神經(jīng)節(jié)、腦神經(jīng)節(jié)、腸中少量表達;在心和胃中表達量最低。中華絨螯蟹在不同的蛻皮時期中,通過熒光定量試驗得出,肝胰臟中CYP2基因表達量在蛻皮前期和蛻皮期最高;眼柄中CYP2基因表達量從蛻皮期到蛻皮后期有上升趨勢;鰓中CYP2基因表達量在蛻皮前期最高;Y器官、腦神經(jīng)節(jié)和腸中CYP2基因表達量在蛻皮期最高;肌肉中CYP2基因表達量在蛻皮前期最高;胸神經(jīng)節(jié)和胃中CYP2基因表達量在蛻皮后期最高;Y器官中CYP2基因在蛻皮前期表達量高于蛻皮后期和蛻皮期。以上試驗結果表明,CYP2對中華絨螯蟹蛻皮生長中的調(diào)控可能起到重要作用。

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