【摘要】：眾所周知,利用同源重組原理,對DNA雙鏈斷裂(double-strand breaks,DSBs)引起的基因損傷進(jìn)行修復(fù)是早期研究人員用于制造基因突變小鼠的方法之一(Capecchi,1989)。但由于其效率低以及消耗時間過長而被鋅指核糖核酸酶(ZFNs)和轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶(TALENs)所取代(Bibikova et al.,2002;Moscou and Bogdanove,2009)。然而,ZFNs和TALENs也并非最優(yōu)基因修飾技術(shù),兩者因其步驟復(fù)雜和細(xì)胞毒性,運(yùn)用受到限制。近年來,已逐步被一種新基因編輯技術(shù)CRISPR/Cas9所代替。CRISPR/Cas9最初起源于細(xì)菌的自我防御系統(tǒng),是近年運(yùn)用于細(xì)胞和動物模型基因改造的主要方法,可以快速而高效獲得基因敲除模型。泛素化系統(tǒng)是機(jī)體維持正常生物功能的蛋白降解系統(tǒng),也是近年的研究熱點(diǎn),睪丸特異表達(dá)基因Rnf148是泛素化連接酶家族成員之一。為此,我們運(yùn)用cas9技術(shù)構(gòu)建小鼠Rnf148基因敲除模型,以進(jìn)一步研究其在小鼠生精過程中的作用。通過針對Rnf148基因外顯子設(shè)計(jì)特異的sg RNA(short guide RNA),與Cas9 m RNA共顯微注射小鼠受精卵,我們成功獲得了Rnf148的F0代敲除小鼠,將其與野生型小鼠交配,進(jìn)一步成功獲得了純合Rnf148基因敲除小鼠。因此,利用cas9技術(shù)確實(shí)可以獲得基因敲除鼠用于后續(xù)研究。

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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