【摘要】：研究背景:子宮肌瘤(human uterine leiomyomas)是多發(fā)生于生育期婦女的一種對(duì)雌孕激素敏感的良性腫瘤,除了可引起月經(jīng)紊亂、經(jīng)量過多等癥狀,更是引起子宮全切術(shù)的常見病因。已知遺傳因素、性激素、生長(zhǎng)因子等在子宮肌瘤的形成與生長(zhǎng)中起重要作用,但到目前為止,子宮肌瘤確切的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,治療上以手術(shù)治療為主,保守治療效果欠佳,因此探索其發(fā)病的分子及細(xì)胞機(jī)制將有利于疾病的保守治療。最新的研究發(fā)現(xiàn),非編碼小RNA(micro RNA,miRNA)在子宮肌瘤發(fā)生中起著非常重要的調(diào)控作用。2012年,Boryana等通過高通量測(cè)序的方法發(fā)現(xiàn),超過50種miRNAs在子宮肌瘤中表達(dá)異常,但是迄今為止其中多種miRNAs表達(dá)的定量改變及相應(yīng)靶基因的鑒定的報(bào)道比較少。因此特設(shè)計(jì)本課題,結(jié)合目前研究現(xiàn)狀,我們從高通量分析中確定有表達(dá)異常但未見相關(guān)定量分析研究的miRNAs中,隨機(jī)選定miR-135b、miR-217、miR-363、miR-451、miR-490、miR-590等6種miRNAs作為研究對(duì)象,對(duì)這些miRNAs進(jìn)行差異表達(dá)的定量分析及靶基因鑒定,爭(zhēng)取為子宮肌瘤的保守治療提供基于miRNA方向的新靶點(diǎn)。方法:在本次實(shí)驗(yàn)中,我們首先使用ABI公司的micro RNA定量試劑盒進(jìn)行6種miRNA的熒光定量分析,再通過miRNA靶基因預(yù)測(cè)的網(wǎng)站Target Scan對(duì)定量分析有變化的miRNA的前三位靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè),并采用RT-PCR方法進(jìn)行靶基因的定量分析。最后對(duì)有定量變化的靶基因運(yùn)用熒光霉素報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)系統(tǒng)驗(yàn)證靶基因的真實(shí)性。結(jié)果:(1)和瘤旁組織相比,肌瘤組織中miR-363上調(diào)5.2倍、miR-490上調(diào)6.2倍、miR-135b上調(diào)4.9倍,miR-217下降19%、miR-590下降23%、miR-451下降33%。(2)和瘤旁組織相比,肌瘤組織中miR-363有兩個(gè)靶基因(FNIP1和SLC12A5)表達(dá)水平顯著降低,miR-135b有一個(gè)靶基因(NR3C2)表達(dá)水平顯著降低,miR-590有兩個(gè)靶基因(ZNF367和YOD1)的表達(dá)水平顯著升高;其余13個(gè)候選靶基因表達(dá)未觀察到明顯變化。(3)上述五種表達(dá)變化的靶基因,經(jīng)熒光霉素報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證,最終證實(shí)PNIP1、NR3C2、ZNF367分別為miR-363、miR-135b、miR-590的靶基因,可能在肌瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。結(jié)論:綜上所述,本實(shí)驗(yàn)中6種miRNAs均觀察到差異表達(dá)的定量改變,但進(jìn)一步靶基因鑒定最終僅確定了PNIP1、NR3C2、ZNF367分別為miR-363、miR-135b、miR-590的靶基因,相關(guān)性分析顯示這三個(gè)靶基因表達(dá)均與相應(yīng)的miRNA呈顯著的負(fù)相關(guān),符合miRNA是通過抑制靶基因起作用的這一規(guī)律。以上提示我們盡管多種miRNA表達(dá)可發(fā)生變化,但可能不是每種miRNA對(duì)子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展均可發(fā)揮作用,通過實(shí)驗(yàn)確定子宮肌瘤中的miRNA及其靶基因,可以為子宮肌瘤的發(fā)病機(jī)制及治療研究提供分子機(jī)制方面的依據(jù),有助于研究子宮肌瘤的保守靶向治療,降低手術(shù)率。
【圖文】：

第一部分 六種 miRNAs 在子宮肌瘤組織中的差異表達(dá)miRNA 廣泛參與了血管生成、細(xì)胞增殖等各種生理病理過程，目前國(guó)內(nèi)外在子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜癌和宮頸癌與 miRNA 關(guān)系方面有大量研究，均發(fā)現(xiàn) miRNA 在這些疾病的發(fā)生發(fā)展中有重要作用。在子宮肌瘤的樣品中，也不乏有通過芯片分析miRNA 的表達(dá)變化的，但是對(duì)其精細(xì)定量的 miRNA 仍然較少。本研究對(duì)于芯片分析結(jié)果中的表達(dá)變化比較明顯的部分候選 miRNA 進(jìn)行了精確的 QPCR 定量分析。對(duì)其中上調(diào)的三個(gè) miRNA，即 miR-363、miR-490、miR-135b 分析發(fā)現(xiàn)，，和瘤旁組織相比，miR-363、miR-490、miR-135b 等的表達(dá)在肌瘤組織中有著顯著的表達(dá)上調(diào)，上調(diào)倍數(shù)分別為 5.2 倍，6.2 倍以及 4.9 倍(圖 1A)。另外，我們同時(shí)也檢測(cè)了三個(gè)主要下降的miRNA，即miR-217、miR-590、miR-451，結(jié)果顯示它們則有著顯著的下調(diào)，分別降低至瘤旁組織的 19%，23%以及 33%(圖 1B)。

Targetscan軟件對(duì)miR-490靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)的結(jié)果
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.33

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 陳慶云;張小燕;;子宮肌瘤發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志;2012年12期

本文編號(hào)：2575375