【摘要】：花色苷(Anthocyanins),不僅能夠提高植株適應(yīng)和抵御逆境的能力,而且具有明顯的保健功能,是決定紅葡萄酒品質(zhì)和感官質(zhì)量的重要因素之一。植物體內(nèi)UFGT是合成花色苷的最后一個(gè)關(guān)鍵酶,直接影響花色苷的含量。本試驗(yàn)以赤霞珠(Vitis vinifera L.cv Cabernet Sauvignon)葡萄為試材,在獲得ufgt基因全長(zhǎng)的基礎(chǔ)上,制備多克隆抗體；定期對(duì)葡萄植株進(jìn)行UV-C照射,在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上研究UV-C照射對(duì)ufgt表達(dá)和花色苷積累的影響,主要結(jié)果如下：擴(kuò)增葡萄果實(shí)ufgt基因全長(zhǎng)1371 bp,并構(gòu)建克隆載體。將克隆載體與表達(dá)載體pET-30a進(jìn)行雙酶切,重組得到表達(dá)載體pET-ufgt。優(yōu)化蛋白表達(dá)條件,使UFGT蛋白高效表達(dá)并純化,以此為抗原,免疫新西蘭白兔,制備UFGT多克隆抗體。以赤霞珠葡萄果實(shí)為試材,研究對(duì)照和UV-C照射10 min后UFGT對(duì)花色苷含量變化規(guī)律的影響。采用熒光定量技術(shù)分析ufgt基因表達(dá)規(guī)律,結(jié)果表明UV-C照射10 min并未明顯誘導(dǎo)ufgt基因的表達(dá),其表達(dá)規(guī)律與對(duì)照大致相同；采用Western-blotting技術(shù),分析UFGT蛋白含量變化規(guī)律,結(jié)果表明UV-C處理10 min沒(méi)有改變UFGT蛋白的變化規(guī)律,但明顯誘導(dǎo)了UFGT蛋白的積累；采用高效液相色譜技術(shù)和分光光度計(jì)法分別分析UFGT酶活性和花色苷含量的變化規(guī)律,結(jié)果表明UV-C照射10min后UFGT酶活性和花色苷含量均都高于對(duì)照；分析可知對(duì)照和UV-C照射10 min后花色苷含量與ufgt基因表達(dá)、蛋白含量及酶活性均呈顯著正相關(guān)。由UFGT生物信息學(xué)分析可得,UFGT蛋白由456個(gè)氨基酸殘基組成,分子量大小約為50 kDa,可能包含信號(hào)肽與蛋白跨膜結(jié)構(gòu),其二級(jí)結(jié)構(gòu)由35.53% α-螺旋、16.67%延伸鏈和47.81%無(wú)規(guī)則卷曲組成。分析親緣性可知,赤霞殊葡萄UFGT蛋白與山葡萄的同源性最高.與草莓同源性次之,與玉米的同源性較低。
【圖文】：

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■逡逑Ｈ逡逑圖７葡萄果實(shí)總ＲＮＡ電泳圖逡逑Ｆｉｇ．７邋Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ邋ｏｆ邋ｔｏｔａｌ邋ＲＮＡ邋ｆｒｏｍ邋ｇｒａｐｅ邋ｂｅｒｒｉｅｓ逡逑３．２邋居ｆ基因的民Ｔ－ＰＣ民擴(kuò)增逡逑用Ｔａｋａｒａ公司的反轉(zhuǎn)錄試劑盒將葡萄果實(shí)總民ＮＡ反轉(zhuǎn)錄成ｃＤＮＡ，再板進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增，，瓊脂糖凝膠檢測(cè)得到長(zhǎng)度約為１５００邋ｂｐ的基因片段，與已／ｇｆ編碼框基因大致相符。逡逑１邐Ｍ逡逑
【學(xué)位授予單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S663.1

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本文編號(hào)：2571270