發(fā)布時(shí)間：2019-11-30 08:39

【摘要】：近些年CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)已廣泛應(yīng)用于作物遺傳育種中,經(jīng)過(guò)拷貝數(shù)篩選得到的單拷貝基因編輯株系,可以進(jìn)行遺傳分離獲得具有改良性狀但不攜帶外源基因成分的非轉(zhuǎn)基因植株,消除轉(zhuǎn)基因安全性的風(fēng)險(xiǎn)。目前拷貝數(shù)的檢測(cè)主要采用Southern雜交,但是該方法存在操作復(fù)雜,需要相對(duì)大量的植物材料等缺點(diǎn),不能進(jìn)行高通量的篩選。為建立簡(jiǎn)便高效的基因編輯番茄植株中外源基因拷貝數(shù)的檢測(cè)體系,以內(nèi)源性基因APX(抗壞血酸過(guò)氧化物酶基因)作為內(nèi)參基因,外源性基因HPT(潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因)作為目的基因,利用Taqman法的實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),檢測(cè)有12株P(guān)DS基因(八氫番茄紅素脫氫酶基因)編輯番茄中外源抗性基因HPT的拷貝數(shù)為1,初步建立了一種檢測(cè)基因編輯植株中外源基因整合拷貝數(shù)的方法,為快速可靠的篩選單拷貝改良株系奠定了一定的技術(shù)基礎(chǔ)。

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7 王s，

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