【摘要】：研究目的本實驗研究白細(xì)胞介素35(Interleukin 35,IL-35)基因修飾的間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)對同種異體小鼠心臟移植排斥反應(yīng)的影響及其作用機(jī)制,探索出有效減輕移植術(shù)后排斥反應(yīng)、誘導(dǎo)免疫耐受的新途徑。研究方法1、利用Ⅰ型膠原酶消化法獲取小鼠脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(adipose tissue-derived MSCs,ad-MSCs),應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)進(jìn)行表型鑒定。2、體外以過表達(dá)IL-35慢病毒顆粒感染小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測細(xì)胞上清中IL-35表達(dá)情況,成功獲得IL-35基因修飾的MSCs(IL-35-MSCs)。3、建立小鼠異位腹腔心臟移植模型,設(shè)置IL-35-MSCs實驗組、MSCs處理組、生理鹽水對照組、同系對照組。觀察各組移植心臟存活時間,評估術(shù)后5天移植物急性排斥反應(yīng)病理分級;蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)法檢測移植心臟IL-17表達(dá)水平;ELISA法檢測術(shù)后5天各組外周血IL-35濃度;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測術(shù)后5天各組小鼠體內(nèi)T細(xì)胞亞群變化。研究結(jié)果1、小鼠脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞成功獲取,過表達(dá)IL-35慢病毒載體成功感染間充質(zhì)干細(xì)胞,感染后細(xì)胞上清IL-35濃度達(dá)到265.8±16.650 pg/ml。2、成功構(gòu)建小鼠異位腹腔心臟移植模型,與異系生理鹽水對照組(6.17±0.753d)相比較:MSCs處理組(10.67±1.211d)及IL-35-MSCs實驗組(14.5±1.049d)移植心臟平均存活時間明顯延長(P0.01);術(shù)后5天移植物急性排斥反應(yīng)病理分級較對照組明顯降低(P0.01)。3、ELISA法結(jié)果顯示IL-35-MSCs實驗組小鼠體內(nèi)IL-35穩(wěn)定表達(dá),濃度達(dá)60.71±5.38 pg/ml。4、與對照組相比,MSCs處理組及IL-35-MSCs實驗組術(shù)后5天外周血和脾臟Th1/Th2、Th17比例均明顯降低(P0.01),脾臟CD4+CD25+T細(xì)胞比例明顯增高(P0.01)。5、Western Blot檢測結(jié)果顯示MSCs處理組及IL-35-MSCs實驗組移植物IL-17蛋白表達(dá)水平較生理鹽水對照組明顯降低。研究結(jié)論1、過表達(dá)IL-35的慢病毒能夠成功、高效率感染小鼠來源的ad-MSCs;在體內(nèi)外實驗中,IL-35-MSCs均能夠持續(xù)、有效表達(dá)IL-35。2、小鼠異位腹腔心臟移植模型是研究器官移植排斥反應(yīng)的理想動物模型。IL-35-MSCs對同種異系小鼠心臟移植有抗排斥作用,其機(jī)制可能為IL-35及MSCs產(chǎn)生免疫調(diào)控協(xié)同作用,刺激CD4+CD25+Treg的生成,誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)Th1/Th2平衡偏移、降低Th17細(xì)胞比例,延長心臟存活時間。IL-35-MSCs細(xì)胞免疫療法可能成為有效誘導(dǎo)移植免疫耐受的新途徑。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R654.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2555772