【摘要】：親環(huán)蛋白10(Cyclophilin 10,Cyp10)是親環(huán)蛋白家族成員之一,這是一類廣泛存在于真核及原核生物內(nèi)的蛋白家族,其共性是都具有肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶(Peptidyl-prolyl cis-trans isomerases,PPIase)活性。有研究表明,Cyp10可能參與了腫瘤細(xì)胞凋亡蛋白胞質(zhì)分布的調(diào)控,但在昆蟲先天免疫中的作用沒有見到報道。本研究以斜紋夜蛾Spodoptera litura為研究對象,以寄生后斜紋夜蛾血細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中發(fā)現(xiàn)的特異cyp10序列為基礎(chǔ),通過RT-PCR克隆出了cyp10基因,通過生物信息學(xué)方法對此序列進行開放閱讀框分析(Open Reading Frame,ORF)和序列同源性比對,發(fā)現(xiàn)cyp10基因ORF全長486 bp,編碼161個氨基酸,具有肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶家族標(biāo)簽序列:YNGSLFHRNIKGFIVQTG,因此確定為親環(huán)蛋白基因家族成員。構(gòu)建了包括ORF全長編碼區(qū)的原核表達(dá)載體p ET32a-Cyp10及真核表達(dá)載體p IZT/V5-His-Cyp10,經(jīng)Western blot證明,p ET32a-Cyp10和p IZT/V5-His-Cyp10可分別在大腸桿菌和鱗翅目昆蟲細(xì)胞系(Hi5,Sf9和Spli221)中表達(dá),蛋白分子量分別是26 k Da和22 k Da。之后以細(xì)胞免疫熒光定位法探索Cyp10在家蠶細(xì)胞Bm N內(nèi)的分布,發(fā)現(xiàn)Cyp10主要分布于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。這些結(jié)果為進一步探索Cyp10在昆蟲先天免疫中的作用奠定了一定基礎(chǔ)。
【圖文】：

)洗兩次(10min×2)，再加入二抗AlexaFluor溲568GoatAnti-ＲabbitlgG(H+L)(1∶2000)孵育1h。1×PBS洗兩次(5min×2)，加入鬼筆環(huán)肽稀釋40倍(1×PBS配制)，37℃孵育30－60min。1×PBS洗一次(5min)。加入DAPI(終濃度為300nmol/L)室溫孵育5min。熒光顯微鏡觀察。2結(jié)果與分析2.1斜紋夜蛾cyp10基因的克隆通過對寄生后斜紋夜蛾血細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果的分析，，獲得了cyp10基因cDNA的預(yù)測序列。以此為模板，設(shè)計特異性引物(表1)，以提取斜紋夜蛾血細(xì)胞mＲNA反轉(zhuǎn)錄獲得的cDNA為模板，PCＲ擴增獲得了一條490bp的特異性片段(圖1)。通過NCBI在線OＲF查找工具，找到了特異的cyp10基因序列，根據(jù)OＲF設(shè)計了帶有酶切位點的引物(表1)，為后面表達(dá)載體的構(gòu)建做準(zhǔn)備。圖1斜紋夜蛾中cyp10基因的PCＲ擴增產(chǎn)物Fig.1PCＲproductofcyp10inSpodopteralitura590

環(huán)境昆蟲學(xué)報JournalofEnvironmentalEntomology39卷圖2斜紋夜蛾Cyp10與其它物種的同源比對Fig.2MultiplesequencealignmentofCyp10fromSpodopteraliturawiththosefromotherspecies注:實心箭頭指示的是親環(huán)蛋白家族標(biāo)簽序列;空心箭頭指示的是磷酸化位點。大紅斑蝶，EHJ72048.1;家蠶，XP_004928560.1;人類，NP_570981.1;斑馬魚，NP_001002146.1。Note:ThesolidarrowindicatesthetagsequenceofCyclophilinproteinfamily;thehollowarrowindicatesthephosphorylationsites.Danausplexippus，EHJ72048.1;Bombyxmori，XP_004928560.1;Homosapiens，NP_570981.1);Daniorerio，NP_001002146.1．圖3斜紋夜蛾Cyp10與其他物種Cyps的系統(tǒng)進化樹Fig.3PhylogeneticanalysisbasedonaminoacidsequencesofSpliCyp10proteinandotherinsectcyclophilinproteins592
【作者單位】： 云南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院云南省高校動物遺傳多樣性和進化重點實驗室;
【基金】：國家自然基金項目(31360454,31260448,31560528) 云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計劃項目(2012FB120)
【分類號】：S433.4

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳雙林;檳榔芋斜紋夜蛾的發(fā)生及防治[J];蔬菜;2000年05期

2 葉敬用;斜紋夜蛾實用防治技術(shù)[J];江西園藝;2002年03期

3 劉定忠;棉田斜紋夜蛾上升為害的主導(dǎo)原因淺析[J];江西棉花;2003年01期

4 吳傳偉,趙敏,馬立強;斜紋夜蛾為害梨樹的新動向[J];中國植保導(dǎo)刊;2004年12期

5 鐘菊蓮 ,李虹 ,朱永勝;斜紋夜蛾在棉田暴發(fā)的原因及防治技術(shù)[J];江西棉花;2005年04期

6 萬玉群,黃巧云,羅品忠;芋頭生產(chǎn)上斜紋夜蛾的發(fā)生與防治[J];上海農(nóng)業(yè)科技;2005年05期

7 黃巧云,常秋紅,羅品忠;芋頭斜紋夜蛾的發(fā)生與防治[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2005年04期

8 葉慶榮;;仙景芋斜紋夜蛾發(fā)生測報及防治技術(shù)[J];福建農(nóng)業(yè)科技;2006年02期

9 李群;;警惕斜紋夜蛾暴發(fā)成災(zāi)[J];農(nóng)藥市場信息;2006年13期

10 楊喬良;;蓮田斜紋夜蛾發(fā)生與防治[J];福建農(nóng)業(yè);2007年09期

相關(guān)會議論文 前10條

1 謝圣華;林珠鳳;吉訓(xùn)聰;周傳波;梁延坡;;挑治技術(shù)在斜紋夜蛾綜合治理中的應(yīng)用[A];糧食安全與植�？萍紕�(chuàng)新[C];2009年

2 宋秀高;;斜紋夜蛾暴發(fā)的原因與防治技術(shù)[A];第十九屆全國植保信息交流暨農(nóng)藥械交易會論文集[C];2003年

3 李國榮;王玉美;張勝昔;華金平;;斜紋夜蛾—不容忽視的棉田害蟲[A];中國棉花學(xué)會2004年年會論文匯編[C];2004年

4 孫挺舉;房德文;朱琴高;;斜紋夜蛾的發(fā)生規(guī)律與防治措施[A];中國蠶學(xué)會第七屆二次理事會暨學(xué)術(shù)年會論文集[C];2005年

5 陳亮;李兵;浦冠勤;;斜紋夜蛾產(chǎn)生抗藥性的原因及其防治對策[A];中國蠶學(xué)會桑樹病蟲害防治學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

6 浦冠勤;姜德義;王軍;;警惕斜紋夜蛾的發(fā)生與危害[A];中國蠶學(xué)會桑樹病蟲害防治學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

7 劉德文;劉雄;諶超賢;;斜紋夜蛾暴發(fā)原因分析及防治[A];第二十一屆全國農(nóng)藥械“雙交會”論文集[C];2005年

8 李社平;向錦曾;;斜紋夜蛾微粒子蟲的初步研究[A];北京昆蟲學(xué)會成立四十周年學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編[C];1990年

9 ;三葉草坪斜紋夜蛾的發(fā)生和防治策略[A];2006年江蘇省病蟲防治綠皮書[C];2006年

10 林莉;何成興;戴勛;溫麗娜;田育天;胡保文;常劍;吳文偉;趙文軍;夏玉珍;徐益群;;煙草斜紋夜蛾生物學(xué)特性的研究[A];“創(chuàng)新驅(qū)動與現(xiàn)代植�！薄袊参锉Ｗo學(xué)會第十一次全國會員代表大會暨2013年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2013年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 杭州藍(lán)天園林生態(tài)科技股份有限公司 羅會生;斜紋夜蛾防治技術(shù)[N];中國花卉報;2014年

2 許紅 彭傳華;警惕斜紋夜蛾危害水生蔬菜[N];湖北科技報;2001年

3 鎮(zhèn)江市蔬菜病蟲測報站 高小文;四代斜紋夜蛾和豇豆煤霉病發(fā)生偏重[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報;2005年

4 肖愛輝 李雪梅;秋玉米須防斜紋夜蛾危害[N];湖南科技報;2007年

5 王金輝;如何防治斜紋夜蛾[N];湖南科技報;2000年

6 水清;斜紋夜蛾怎么治[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報;2005年

7 劉志強;棉田斜紋夜蛾為害特點與防治[N];山東科技報;2008年

8 辛集市植保站 陳書喬;注意查治棉、薯田斜紋夜蛾[N];河北科技報;2011年

9 李群;警惕斜紋夜蛾暴發(fā)成災(zāi)[N];云南科技報;2008年

10 廣西玉林市三山園藝場 黃家南;抓緊防治玉米斜紋夜蛾[N];農(nóng)民日報;2012年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 范蕊;斜紋夜蛾誘導(dǎo)后大豆葉片蛋白質(zhì)組學(xué)分析及GmSAMS1的克隆和功能研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 張進;斜紋夜蛾與棉鈴蟲化感基因鑒定及受體功能分析[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 周嘉良;斜紋夜蛾耐藥性和生殖對重金屬鉛脅迫的響應(yīng)及分子機理[D];中山大學(xué);2012年

4 黃水金;斜紋夜蛾的抗藥性及其機理研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

5 劉惠芬;斜紋夜蛾核型多角體病毒Ⅱ型基因組DNA復(fù)制原點及ORF63基因分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

6 王洪濤;B型煙粉虱取食誘導(dǎo)的煙草對斜紋夜蛾生長發(fā)育和繁殖的影響及機制[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王緯華;湖南煙草有害動物調(diào)查及其測報和防治研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

2 婁琳琳;殺蟲劑對斜紋夜蛾UDP-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶活性的影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 畢洪論;斜紋夜蛾種群的遺傳調(diào)控[D];福建農(nóng)林大學(xué);2016年

4 杜娟;斜紋夜蛾生物學(xué)及人工飼料的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 辛未一;兩種寄主植物對斜紋夜蛾繁殖及卵黃原蛋白基因（Vg）表達(dá)的影響[D];揚州大學(xué);2016年

6 李賓賓;秋甘藍(lán)田斜紋夜蛾種群動態(tài)及時空生態(tài)位研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

7 蔡楊楊;斜紋夜蛾免疫基因Dorsal和Relish的克隆表達(dá)以及免疫通路研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 楊海燕;水分脅迫和營養(yǎng)對斜紋夜蛾的影響及其機制初探[D];揚州大學(xué);2008年

9 劉志才;廣東佛山地區(qū)斜紋夜蛾發(fā)生規(guī)律及防治研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

10 許冬;斜紋夜蛾取食誘導(dǎo)棉花抑制性消減文庫的構(gòu)建及初步分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年

本文編號：2533277