發(fā)布時(shí)間：2019-07-29 13:02

【摘要】：背景:肺癌是世界上排名比較靠前的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率和致死率在我國(guó)的四大惡性腫瘤之首。之所以肺癌有這么高的死亡率,是由于絕大多數(shù)患者在臨床上確認(rèn)為肺癌時(shí)已發(fā)展到了中晚期,從而錯(cuò)失寶貴的治療時(shí)期。肺癌的預(yù)后5年生存率在醫(yī)術(shù)發(fā)達(dá)地區(qū)都低于15%,在我國(guó)情況就越發(fā)困難。所以急需一種靈敏、高效的肺癌早期診斷方法來降低肺癌發(fā)生率和提高患者預(yù)后存活率。隨著分子技術(shù)的全面發(fā)展,篩選腫瘤分子標(biāo)志物已逐漸成為科研人員研究熱點(diǎn)及重點(diǎn),其中抑癌基因是科研研究者首選目標(biāo)。大量研究表明在腫瘤發(fā)生早期會(huì)出現(xiàn)由異常甲基化而引起抑癌基因表達(dá)沉默的現(xiàn)象。所以抑癌基因異常甲基化可作為肺癌早期診斷中的有效的標(biāo)志物。目的:1.探討RUNX3、RASSFlA和DAPK基因甲基化與肺癌易感性的關(guān)系。2.探討肺癌患者血漿中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO抑癌基因異常甲基化及聯(lián)合檢測(cè)上述五個(gè)基因甲基化在肺癌早期診斷中的價(jià)值。方法:1.采取Meta分析法研究RUNX3、RASSFl A和DAPK基因甲基化與肺癌的關(guān)系。首先通過計(jì)算機(jī)檢索Pubmed、EMBASE、Ovid、相關(guān)期刊論文(CNKI)、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(CBM)、維普數(shù)據(jù)庫(VIP)、萬方數(shù)據(jù)庫等數(shù)據(jù)庫,從中獲取在肺癌中RUNX3、RASSFlA和DAPK基因甲基化已發(fā)表的文獻(xiàn)全文;其次,按照提前設(shè)定好的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)所得到的文獻(xiàn)進(jìn)行逐一仔細(xì)的篩選;最后運(yùn)用RevMan5.2軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。2.收集河北大學(xué)附屬醫(yī)院和保定市第一中心醫(yī)院2015年3月~2016年8月期間被確診為原發(fā)性肺癌患者91例未經(jīng)任何治療的血漿樣本,另收集58例健康人血漿樣本作為對(duì)照。采用甲基化特異PCR(methylation specific-PCR,MSP)法進(jìn)行基因甲基化檢測(cè)。結(jié)果:1.meta分析結(jié)果顯示:(1)通過篩選最終收入36篇文獻(xiàn),RUNX3基因10篇,RASSF1A基因20篇,DAPK基因13篇。(2)RUNX3基因甲基化率在病例組明顯高于對(duì)照組(35.22%9.2%,OR=5.89,95%CI:4.17~8.32,P0.05);亞組分析顯示,RUN X3基因甲基化在組織中的OR值為4.59(95%CI:3.20~6.59,P0.05),血液樣本的O R值為63.24(95%CI:8.54~468.37,P0.05)。(3)RASSF1A基因在病例組中的甲基化率為41.30%,對(duì)照組中為2.31%,合并統(tǒng)計(jì)量OR值為23.91(95%CI:16.55~34.54,P0.05),進(jìn)一步對(duì)該基因在腫瘤組織與血液、痰液中的甲基化率進(jìn)行分析,組織中的甲基化率(OR=21.13,95%CI:13.64~32.74,P0.05)與血液中甲基化率相近(OR=83.96,95%CI:26.29~268.08,P0.05),兩者中甲基化率均高于痰液中的甲基化率(OR=8.28,95%CI:3.18~21.59,P0.05)。(4)DAPK基因在病例組甲基化率為42.11%高于在對(duì)照組中的甲基化率7.16%(OR=9.98,95%CI:5.91~16.87,P0.05),亞組結(jié)果顯示,該基因在腫瘤組織中的甲基化率(OR=8.83,95%CI:5.10~15.29,P0.05)高于血液樣本(OR=39.32,95%CI:7.68~201.26,P0.05)。2.肺癌患者血漿中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因甲基化率分別為47.25%(43/91)、51.65%(47/91)、27.47%(25/91)、36.26%(33/91)、41.76%(38/91);對(duì)照組中僅PTPRO基因出現(xiàn)甲基化,其甲基化率為5.2%(3/58),而RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK基因均未檢出甲基化;五種基因的甲基化在兩組間的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。RUNX3基因甲基化與肺癌分型以及組織分化水平相關(guān)(P0.05);RASSF1A基因甲基化在低分化組中大于高分化組(P0.05);DAPK基因甲基化與肺癌患者的臨床分期相關(guān),在Ⅲ期與Ⅳ期中的甲基化率高于Ⅰ期和Ⅱ期(P0.05);3-OST-2基因與PTPRO基因甲基化與臨床病理特性均沒有顯著性不同(P0.05)。聯(lián)合檢測(cè)五種基因的甲基化,靈敏度提高至92.31%(84/91)、特異度為94.83%。結(jié)論:1.由meta分析得出,RUNX3、RASSF1A和DAPK基因甲基化與肺癌易感性存在明顯相關(guān)性。2.聯(lián)合檢測(cè)血漿中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因甲基化率高于單個(gè)基因的甲基化率,說明聯(lián)合檢測(cè)此組合的甲基化水平會(huì)提高肺癌早期診斷的準(zhǔn)確性,可以作為一組高效的肺癌分子指標(biāo)。
【圖文】：

圖 1 DNA 甲基化過程Figure1 The process of DNA methylationRUNX3（runt-related transcription factor 3）基因，位于人染色體 1 號(hào)短臂 1p36.1長(zhǎng)約 67 Kb，含有 P1、P2 二個(gè)啟動(dòng)子，6 個(gè)外顯子和 1290 bp 的開放閱讀框[31]。RU白是 TGF-β 信號(hào)通路中下游的一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄因子，其可以與 TGF-β/Smad 復(fù)合激活靶基因，參與調(diào)控上皮細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育，RUNX3 表達(dá)缺失會(huì)造成 TGF-β 信號(hào)亂，最終引起腫瘤的發(fā)生[32]。據(jù) Ito K 等[33]研究發(fā)現(xiàn)，RUNX3 通過與 β- catenin / T合形成三元復(fù)合物，可以減弱 Wnt 經(jīng)典信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中信號(hào)強(qiáng)度，相反胞漿內(nèi)的enin 蛋白會(huì)隨 RUNX3 基因受到抑制而在細(xì)胞中大量聚積，最終會(huì)激活 Wnt 信號(hào)通細(xì)胞增殖與細(xì)胞凋亡失去失衡，進(jìn)而發(fā)生癌變。最近發(fā)現(xiàn) RUNX3 是 MST 信號(hào)的一個(gè)保守元件，在 SAV1 作用下參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[34]。已有研究表明[35,36]，RU一個(gè)抑癌基因，其啟動(dòng)子區(qū) CpG 島甲基化會(huì)導(dǎo)致該基因表達(dá)受到抑制，，且甲基

基化；進(jìn)一步對(duì)癌變小鼠用 DNA 甲基化酶抑制劑（脫氧 5-氮雜胞苷）處理，發(fā)現(xiàn) PTPRO 基因表達(dá)量逐漸回升，腫瘤組織塊也逐漸開始縮小。Motiwala 的研究足以說明，PTPRO 基因是一種潛在的抑癌基因。大量研究報(bào)道[54-58]，在肺癌、乳腺癌、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、食管癌和部分原發(fā)結(jié)腸癌中均有 PTPRO 基因甲基化的存在。這些研究均說明，PTPRO 基因在肺癌中起著很重要的作用，檢測(cè)該基因的甲基化有助于提高肺癌診斷的準(zhǔn)確性。當(dāng)前對(duì) DNA 甲基化檢測(cè)的方法主要有以下幾種[59]：（1）甲基化敏感性限制性內(nèi)切酶-PCR 法（methylation-sensitive restriction Endonuclease-PCR, MSRE-PCR）；（2）亞硫酸氫鹽的修飾；（3）芯片技術(shù)；（4）質(zhì)譜或色譜等精密檢測(cè)手段。本研究采用由 Hermn[22]于 1996 年創(chuàng)立的甲基化特異性 PCR（MSP）法，即亞硫酸氫鹽會(huì)改變 DNA 中的嘧啶堿基狀態(tài)，將其中未甲基化的胞嘧啶中第四位碳上連接的氨基脫掉轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不則發(fā)生改變（見圖 2）。
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳康;孫小波;李艷艷;李亞周;鄧安梅;顏宏利;;CpG島甲基化表型肺癌的分型標(biāo)記及臨床病理特征[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2015年05期

2 黃暉;孔勇;馮旭;彭朝陽;;非小細(xì)胞肺癌CDH13及DAPK基因CpG島甲基化的研究[J];廣西醫(yī)學(xué);2015年04期

3 張立國(guó);劉廣杰;趙俊敏;;肺癌早期診斷進(jìn)展[J];河北醫(yī)藥;2014年14期

4 周楓葉;杜茂林;常福厚;白圖雅;;肺癌患者血漿p16和RASSF1A基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化檢測(cè)診斷意義分析[J];中華腫瘤防治雜志;2014年10期

5 趙培革;魯?shù)聅

本文編號(hào)：2520520