【摘要】：大豆中含硫氨基酸匱乏,限制了大豆的營養(yǎng)價(jià)值和商業(yè)價(jià)值。為了提高大豆的含硫氨基酸含量,利用人工設(shè)計(jì)合成的高含硫氨基酸貯藏蛋白基因(HSSP)轉(zhuǎn)化大豆。以載體p TF101.1為骨架,構(gòu)建植物表達(dá)載體p TFGS,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化大豆品種東農(nóng)50,經(jīng)PCR及試紙條檢測,獲得轉(zhuǎn)基因大豆16株,基因的轉(zhuǎn)化效率為1.94%。對轉(zhuǎn)基因大豆株系GSDL5進(jìn)行組織特異性分析,結(jié)果表明,HSSP基因在種子中超量表達(dá),而在其它組織部位僅有微量表達(dá)。采用接頭PCR方法對株系GSDL5基因組插入位點(diǎn)側(cè)翼序列進(jìn)行克隆,獲得與大豆基因組序列匹配的436 bp側(cè)翼序列,HSSP基因插入2號染色體基因的非編碼區(qū)。經(jīng)研究,獲得了遺傳背景明確的,僅在大豆種子中超量表達(dá)HSSP的轉(zhuǎn)基因株系GSDL5。
[Abstract]:The lack of sulfur amino acids in soybean limits the nutritional and commercial value of soybean. In order to increase the content of sulfur-containing amino acids in soybean, the high sulfur amino acid storage protein gene (HSSP) was used to transform soybean. Using vector p TF101.1 as skeleton, plant expression vector p TFGS, was constructed and transformed into soybean variety Dongnong 50 by Agrobacterium tumefaciens mediated method. 16 transgenic soybean strains were obtained by PCR and strip test, and the gene transformation efficiency was 1.94%. The tissue specificity of transgenic soybean line GSDL5 was analyzed. the results showed that HSSP gene was overexpressed in seeds and only slightly expressed in other tissues. The flanking sequence of GSDL5 genome insertion site of strain GSDL5 was cloned by junction PCR, and the 436 bp flanking sequence matched with soybean genome sequence was obtained. HSSP gene was inserted into the non-coding region of chromosome 2 gene. Through the study, a transgenic line GSDL5. with clear genetic background and overexpressing HSSP in soybean seeds was obtained.
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;
【基金】：轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(xiàng)(2014ZX08004-003-002)
【分類號】：S565.1

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本文編號：2518816