【摘要】：花香和抗性分別是百合觀賞性狀和栽培性狀的重要方面。本試驗以‘朱麗葉’和‘索邦’為材料,利用實時熒光定量PCR研究了9個花香和抗性相關(guān)基因(LhDXS,HDS,GGPPS,LPS,LhTPS,LhKAT,LhHPL,LTCOR12,PPO3)在2個百合品種花、葉、鱗片中表達(dá)模式的一致性。研究表明:9個基因在花、葉、鱗片中的表達(dá)特征都存在顯著差異,說明這9個基因的表達(dá)具有器官特異性。其中LhKAT和GGPPS在2個品種中的表達(dá)特征基本一致,而LhDXS、HDS、LhTPS、LPS、LhHPL、LTCOR12和PPO3在兩個品種中的表達(dá)特征存在差異,說明這7個基因具有品種特異性。本研究為百合花香和抗性分子育種提供了理論依據(jù)。
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圖片說明： 片3個器官中的RNA進(jìn)行實時熒光定量PCR(qPCR)，以觀察其在品種和器官中表達(dá)的差異性，為百合花香和抗性育種提供理論依據(jù)。1結(jié)果與分析1.1百合不同品種不同器官總RNA提取利用RNA抽提試劑分別對不同品種百合的花、葉、鱗片總RNA進(jìn)行提取，取4μL總RNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，得到無降解、無DNA污染的RNA條帶(圖1)。通過生物光度計檢測各組織總RNA的OD260/OD280值均在1.8以上。1.2內(nèi)參基因的選擇在‘朱麗葉’花、葉、鱗片中對待選內(nèi)參基因GAPDF、psaA、EF1α、BHLH、18SrRNA、Actin進(jìn)行PCR擴(kuò)增(圖2)。其中EF1α、18SrRNA、Actin在3個器官中都有明顯擴(kuò)增，其余內(nèi)參在個別器官存在無條帶或條帶弱的現(xiàn)象。對‘朱麗葉’花、葉、鱗片中的EF1α、18SrRNA、Actin分別進(jìn)行qPCR，得到CT值，利用NormFinder軟件對各個內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，穩(wěn)定值越低，內(nèi)參基因的穩(wěn)定性越高，分析可知Actin的穩(wěn)定性最高(圖3)。1.3抗性相關(guān)基因在兩個百合品種中的表達(dá)模式基因LTCOR12和PPO3在‘朱麗葉’以及‘索邦’中的表達(dá)模式圖顯示LTCOR12和PPO3在‘朱麗葉’圖2內(nèi)參基因在'朱麗葉'在不同組織中的表達(dá)注:M:Marker;1~6分別是GAPDH,psaA,EF1α,BHLH,18SrRNA,Actin在花器官中的產(chǎn)物;7~12分別是GAPDH,psaA,EF1α,BHLH,18SrRNA,Actin在葉器官中的產(chǎn)物;13~18分別是GAPDH,psaA,EF1α,BHLH,18SrRNA,Actin在鱗片中的產(chǎn)物Figure2Theexpressionofreferencegenesindifferenttissuesof'Julius'Note:M:Marker;1~6istheproductionofGAPDH,psaA,EF1α,.BHLH,18SrRNA,Actininflower;7~12istheproductionofGAPDH,psaA,EF1α,BHLH,18SrRNA,Actininleaf;13~18istheproductionofGAPDH,psaA,EF1α,BHLH,18SrRNA,Actininsca
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圖片說明： TCOR12和PPO3)以及7個與花香相關(guān)的基因(LhDXS,HDS,GGPPS,LhTPS,LPS,LhHPL和LhKAT)。為了研究這些基因在‘朱麗葉’和‘索邦’花、葉、鱗片3個器官中的表達(dá)模式，，我們分別提取了這2種百合在花、葉、鱗片3個器官中的RNA進(jìn)行實時熒光定量PCR(qPCR)，以觀察其在品種和器官中表達(dá)的差異性，為百合花香和抗性育種提供理論依據(jù)。1結(jié)果與分析1.1百合不同品種不同器官總RNA提取利用RNA抽提試劑分別對不同品種百合的花、葉、鱗片總RNA進(jìn)行提取，取4μL總RNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，得到無降解、無DNA污染的RNA條帶(圖1)。通過生物光度計檢測各組織總RNA的OD260/OD280值均在1.8以上。1.2內(nèi)參基因的選擇在‘朱麗葉’花、葉、鱗片中對待選內(nèi)參基因GAPDF、psaA、EF1α、BHLH、18SrRNA、Actin進(jìn)行PCR擴(kuò)增(圖2)。其中EF1α、18SrRNA、Actin在3個器官中都有明顯擴(kuò)增，其余內(nèi)參在個別器官存在無條帶或條帶弱的現(xiàn)象。對‘朱麗葉’花、葉、鱗片中的EF1α、18SrRNA、Actin分別進(jìn)行qPCR，得到CT值，利用NormFinder軟件對各個內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，穩(wěn)定值越低，內(nèi)參基因的穩(wěn)定性越高，分析可知Actin的穩(wěn)定性最高(圖3)。1.3抗性相關(guān)基因在兩個百合品種中的表達(dá)模式基因LTCOR12和PPO3在‘朱麗葉’以及‘索邦’中的表達(dá)模式圖顯示LTCOR12和PPO3在‘朱麗葉’圖2內(nèi)參基因在'朱麗葉'在不同組織中的表達(dá)注:M:Marker;1~6分別是GAPDH,psaA,EF1α,BHLH,18SrRNA,Actin在花器官中的產(chǎn)物;7~12分別是GAPDH,psaA,EF1α,BHLH,18SrRNA,Actin在葉器官中的產(chǎn)物;13~18分別是GAPDH,psaA,EF1α,BHLH,18SrRNA,Actin在鱗片中的產(chǎn)物Figure2Theexpressionofreferencegenesindifferenttissuesof'Julius'Note:M:Marker;1~6i
【作者單位】： 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院;
【基金】：山西省應(yīng)用基礎(chǔ)研究項目(201601D011077) 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)引進(jìn)人才科研啟動項目(2014ZZ02) 山西省普通高等學(xué)校大學(xué)生創(chuàng)新性創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項目(2015099);山西省普通高等學(xué)校大學(xué)生創(chuàng)新性創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項目(2015102)共同資助
【分類號】：Q943.2;S682.29

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本文編號：2515901