【摘要】：水稻稻瘟病是影響我國(guó)水稻安全生產(chǎn)最嚴(yán)重的病害,如何篩選天然植物源農(nóng)藥代替化學(xué)農(nóng)藥來(lái)防治稻瘟病是農(nóng)藥研究開發(fā)的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明,檸檬醛對(duì)水稻稻瘟病菌有較好的抑菌活性,通過(guò)電鏡技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),檸檬醛能破壞稻瘟病菌菌絲細(xì)胞壁,但其具體作用靶標(biāo)位點(diǎn)還未明確。因此,本研究采用酶活性法測(cè)定了檸檬醛對(duì)稻瘟病菌細(xì)胞壁關(guān)鍵酶的活性,明確了檸檬醛對(duì)稻瘟病菌細(xì)胞壁影響較大的關(guān)鍵酶;其次,采用PCR技術(shù)探究了檸檬醛對(duì)稻瘟病菌細(xì)胞壁靶標(biāo)酶基因的差異表達(dá),探明了檸檬醛對(duì)稻瘟病菌細(xì)胞壁的作用靶標(biāo),為尋找具有新型靶標(biāo)位點(diǎn)的高效、低毒殺菌劑的生物合理設(shè)計(jì)提供參考依據(jù)。其主要研究結(jié)果有以下幾個(gè)方面:1.山蒼子精油主要成分檸檬醛對(duì)稻瘟病菌具有較好的生物活性。采用生長(zhǎng)速率和孢子萌發(fā)測(cè)定法,分別測(cè)定了檸檬醛對(duì)稻瘟病菌菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)及牙管長(zhǎng)度的抑制作用,試驗(yàn)結(jié)果表明,稻瘟病菌菌絲生長(zhǎng)抑制率與檸檬醛濃度成正相關(guān);稻瘟病菌孢子萌發(fā)率隨著檸檬醛濃度的增大而減小,芽管長(zhǎng)度亦是類似。其中檸檬醛對(duì)稻瘟病菌菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的EC50分別為40.28和37.12μg/mL。2.檸檬醛可明顯提高稻瘟病菌細(xì)胞壁中幾丁質(zhì)酶的活性。采用酶活性法測(cè)定了檸檬醛對(duì)稻瘟病菌幾丁質(zhì)酶活性的作用,結(jié)果表明,檸檬醛處理后稻瘟病菌幾丁質(zhì)酶的活性先降低再升高,最后又降低,24 h后趨于穩(wěn)定的變化。當(dāng)檸檬醛濃度為100μg/mL時(shí),在作用于稻瘟病菌菌絲0.5 h和1 h后,幾丁質(zhì)酶的活性分別為對(duì)照組的0.80和1.14倍,當(dāng)處理菌絲時(shí)間增加到12 h與24 h時(shí),該酶活性為對(duì)照的2.14和1.38倍;其中濃度為200.00μg/mL的藥劑在作用于稻瘟病菌1 h和12 h時(shí),菌絲體內(nèi)幾丁質(zhì)酶的活性為對(duì)照組1.54和1.76倍;當(dāng)藥劑濃度為200.00μg/mL在作用于菌絲3 h時(shí),菌絲體內(nèi)幾丁質(zhì)酶的活性達(dá)到最大,為對(duì)照組的2.38倍。3.檸檬醛對(duì)稻瘟病菌細(xì)胞壁中β-(1,3)葡聚糖酶的活性無(wú)顯著提高。利用β-(1,3)-GA試劑盒完成了檸檬醛對(duì)β-(1,3)葡聚糖酶活性的測(cè)定,結(jié)果表明,檸檬醛雖能提高稻瘟病菌β-(1,3)-葡聚糖酶的活性,但從測(cè)定的時(shí)間段來(lái)看,稻瘟病菌β-(1,3)-葡聚糖酶的活性一直和對(duì)照組沒有特別顯著的差異。其中檸檬醛濃度為100μg/mL在作用于菌絲3 h和9 h時(shí),β-(1,3)葡聚糖酶的活性分別為對(duì)照組1.36和1.29倍,在處理菌絲12 h與24 h后,該酶活性為對(duì)照的1.40和1.34倍;當(dāng)檸檬醛濃度為200.00μg/mL在作用于菌絲6 h和12 h時(shí),β-(1,3)葡聚糖酶活性為對(duì)照組1.27和1.63倍,當(dāng)處理時(shí)間增至24 h時(shí),該酶活性為對(duì)照的1.29倍。4.相同濃度的檸檬醛在不同時(shí)間段對(duì)稻瘟病菌幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)均有上調(diào)作用。測(cè)定結(jié)果表明,同一濃度檸檬醛藥劑在誘導(dǎo)稻瘟病菌6、12、24 h后,幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)量均顯著升高,隨著時(shí)間的增加,基因表達(dá)量上調(diào)幅度整體表現(xiàn)為先升高后降低。檸檬醛濃度為100μg/mL時(shí),在處理稻瘟病菌菌絲6 h和12 h后,幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)量分別是對(duì)照組的25.31和46.05倍,而在處理24 h后,其上調(diào)幅度為對(duì)照組的31.03倍;當(dāng)檸檬醛濃度是200μg/mL時(shí),在誘導(dǎo)稻瘟病菌菌絲6 h和12 h后,幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)量分別為對(duì)照組的52.51和38.23倍,而在處理24 h后,其上調(diào)幅度為對(duì)照組的34.66倍。5.不同濃度的檸檬醛在一定時(shí)間內(nèi)對(duì)稻瘟病菌幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)均有上調(diào)作用。在同一時(shí)間段內(nèi),隨著檸檬醛濃度(0、25、50、100、200μg/mL)的增加,幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)量上調(diào)幅度逐漸增加,到達(dá)一定程度后,呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。在檸檬醛濃度為25和100μg/mL作用于稻瘟病菌12 h后,幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)量分別為對(duì)照組的19.31和46.05倍,而當(dāng)藥劑濃度增加至200μg/mL在作用于菌絲12 h后,其表達(dá)量為對(duì)照組的38.23倍;當(dāng)檸檬醛濃度分別為50和100μg/mL在處理菌絲6 h后,幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)量分別為對(duì)照組的20.72和25.31倍,當(dāng)藥劑濃度增加至200μg/mL在作用于菌絲6 h后,其表達(dá)量為對(duì)照組的52.51倍。結(jié)果表明,在測(cè)定濃度和時(shí)間范圍內(nèi),高濃度的檸檬醛在相對(duì)較短時(shí)間誘導(dǎo)稻瘟病菌后,幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)量上調(diào)幅度最大。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：貴州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S435.111.41

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本文編號(hào)：2491104