【摘要】：研究目的了解本地區(qū)基層醫(yī)院臨床分離的產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(Extended Spectrum Beta-Lactamases,ESBLs)大腸埃希菌常見ESBLs基因型的分布情況,并結(jié)合其對氟喹諾酮類的耐藥情況探索本地區(qū)該菌染色體和質(zhì)粒介導(dǎo)的氟喹諾酮耐藥機制,為臨床治療提供實驗依據(jù)。研究方法1.收集2014年3月至2015年3月基層醫(yī)院臨床送檢的各類標(biāo)本中分離得到的大腸埃希菌,采用紙片擴散法檢測產(chǎn)ESBLs菌株,通過全自動細(xì)菌鑒定和藥敏儀檢測實驗菌株的藥敏結(jié)果。2.用PCR法檢測blaCTX-M-1、blaCTX-M-2、blaCTX-M-9和blaSHV基因,每種基因型隨機選擇10株菌,對其PCR產(chǎn)物進行雙向測序、比對及分析其基因亞型。3.隨機抽取20株對氟喹諾酮類耐藥的上述產(chǎn)ESBLs菌株,用PCR法擴增gyrA/gyr B/parC/parE基因,所獲得的PCR產(chǎn)物進行雙向測序,測序結(jié)果通過blast比對及分析確定其突變位點;同時PCR法檢測50株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌中qnrA、qnrB、qnrS和aac(6')-Ib-cr質(zhì)粒基因攜帶情況,并對陽性PCR產(chǎn)物進行雙向測序。研究結(jié)果1.從臨床送檢的114株各類標(biāo)本中分離得到產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌株50株,占總數(shù)的43.9%(50/114)。50株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對阿莫西林、哌拉西林、頭孢噻吩、頭孢呋辛100%耐藥;對左氧氟沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率分別為70%和80%;對頭孢噻肟、復(fù)方新諾明、慶大霉素和氨曲南呈較高耐藥率;但普遍對β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)方制劑、碳青霉烯類、阿米卡星和頭孢西丁有較高敏感性,菌株對它們的耐藥率除阿莫西林/克拉維酸為24%外,其余均在10%以下。2.50株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌中有46株(92%)攜帶blaCTX-M基因;當(dāng)中33株(66%)攜帶blaCTX-M-9亞群基因,19株(38%)攜帶blaCTX-M-1亞群基因,6株同時含上述兩種亞群blaCTX-M基因。未檢測出blaCTX-M-2、blaSHV型基因。經(jīng)部分測序,CTX-M-1亞群和CTX-M-9亞群分別以CTX-M-15和CTX-M-14亞型為主。3.在隨機選取的20株對喹諾酮耐藥的產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌株中,20個菌株的Gyr A 83和87位均發(fā)生變異;19株菌ParC發(fā)生80位變異、3株發(fā)生84位變異;9株P(guān)arE發(fā)生458位變異、1株發(fā)生445位變異;未發(fā)現(xiàn)gyrB突變位點。50株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌中有10株菌至少攜帶一種質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮耐藥(plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)基因,當(dāng)中4株攜帶qnrS基因,8株攜帶aac(6')-Ib-cr基因,2株同時攜帶上述兩種質(zhì)�；�,未檢出qnrA和qnrB基因;攜帶qnr基因的菌株均同時產(chǎn)CTX-M型ESBL,8株攜帶aac(6’)-Ib-cr基因菌株中有7株同時產(chǎn)CTX-M型ESBLs。結(jié)論1.產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌在本地區(qū)基層醫(yī)院檢出率較高,通常為多重耐藥菌,但普遍對β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)方制劑、碳青霉烯類、阿米卡星和頭孢西丁有較高敏感性。2.本地區(qū)基層醫(yī)院存在一定數(shù)量CTX-M型ESBLs,以CTX-M-9亞群所占比例大,CTX-M-1亞群次之。3.本地區(qū)基層醫(yī)院產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌產(chǎn)生的氟喹諾酮類耐藥與菌體靶位基因變異機制有關(guān);這些耐藥菌株中不僅在常見的gyrA和par C基因出現(xiàn)突變點,也在較少報道的parE基因出現(xiàn)突變點;同時還發(fā)現(xiàn)存在質(zhì)粒介導(dǎo)的氟喹諾酮類耐藥機制,且這些菌均為同時產(chǎn)CTX-M型ESBLs菌株。
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【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R446.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2489693