【摘要】：乙型肝炎是一個(gè)嚴(yán)重威脅人類健康的全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題。目前,乙肝的防治工作主要分為預(yù)防和治療兩個(gè)部分,乙肝預(yù)防性疫苗已被證實(shí)是高免疫原性的,具有保護(hù)性的,能夠有效的預(yù)防乙肝病毒感染。乙肝治療的最終目的是防止肝纖維化、肝功能衰竭和肝癌的進(jìn)展,圍繞此目的,產(chǎn)生了一些抗乙肝病毒的藥物,但這些藥物都無(wú)法解決所有乙肝患者的肝臟損傷問(wèn)題,并且耐藥性也是目前乙肝防治工作中面臨的困難之一。所以亟待發(fā)展一種能夠徹底治愈乙肝的方法,而治療性疫苗是目前最具有發(fā)展?jié)摿Φ闹委熓侄沃弧樘岣咭腋沃委熜砸呙绲拿庖咝Я?研究人員進(jìn)行了大量疫苗構(gòu)建方法和不同免疫策略的嘗試。使用具有免疫增強(qiáng)作用的細(xì)胞因子作為疫苗佐劑便是其中一種策略[1]。已有一些研究結(jié)果證實(shí)IL15能夠增強(qiáng)抗原特異性細(xì)胞免疫反應(yīng)、特異性CTL反應(yīng)以及增加記憶性T淋巴細(xì)胞的存活[2]。本研究選取表達(dá)乙肝病毒HBsAg基因的重組質(zhì)粒pVR-S、重組腺病毒rAdv-S和重組痘病毒rMVA-S,組合成不同免疫策略,輔以pVR-IL15基因佐劑免疫,研究其對(duì)不同免疫策略誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答水平的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在體液免疫應(yīng)答中,pVR-IL15基因佐劑能夠增強(qiáng)本研究中除了單獨(dú)免疫重組病毒策略以外的所有免疫策略誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答。在單獨(dú)免疫重組病毒、一次免疫pVR-S和一次免疫重組病毒、兩次免疫pVR-S和一次免疫重組病毒的策略中,均顯現(xiàn)出rAdv-S誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答水平高于rMVA-S,此三種免疫策略誘導(dǎo)的體液免疫效果由強(qiáng)到弱的順序?yàn)閮纱蚊庖遬VR-S和一次免疫重組病毒策略、一次免疫pVR-S和一次免疫重組病毒策略、單獨(dú)免疫重組病毒策略。免疫兩次重組病毒策略中顯示免疫兩次rMVA-S誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答水平低于交叉免疫rAdv-S和rMVA-S誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答水平。細(xì)胞免疫應(yīng)答檢測(cè)結(jié)果顯示,pVR-IL15基因佐劑均能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)中所有免疫策略誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答水平。免疫兩次重組病毒策略的結(jié)果顯示,免疫同源載體病毒和異源載體病毒所誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫水平無(wú)差異;一次免疫pVR-S和一次免疫重組病毒策略和免疫兩次重組病毒策略所誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答水平無(wú)差異;兩次免疫pVR-S和兩次免疫重組病毒策略所誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答水平在各組免疫策略中效果最好。綜上,pVR-IL15基因佐劑能夠增強(qiáng)各小鼠免疫方案中重組病毒誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答,在細(xì)胞免疫應(yīng)答,pVR-IL15基因佐劑也起到了免疫增強(qiáng)的作用,在免疫兩次重組病毒方案中,pVR-IL15基因佐劑最高可將免疫應(yīng)答水平提高3.6倍。在體液免疫中rAdv-S誘導(dǎo)的免疫效果強(qiáng)于rMVA-S;免疫兩次rMVA-S誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答水平低于交叉免疫rAdv-S和rMVA-S。在細(xì)胞免疫中,免疫同源載體病毒和異源載體病毒所誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫水平無(wú)差異,一次免疫pVR-S和一次免疫重組病毒免疫策略和免疫兩次重組病毒策略所誘導(dǎo)的細(xì)胞免疫效果相當(dāng)。無(wú)論是體液免疫還是細(xì)胞免疫均顯示兩次重組質(zhì)粒與兩次重組病毒聯(lián)合免疫所誘導(dǎo)的免疫效果最好。
[Abstract]:Hepatitis B is a global public health problem that is a serious threat to human health. At present, the prevention and treatment of hepatitis B is divided into two parts: prevention and treatment, and the preventive vaccine of hepatitis B has been proved to be highly immunogenic and protective, and can effectively prevent the hepatitis B virus infection. The ultimate goal of the treatment of hepatitis B is to prevent liver fibrosis, liver failure, and progression of liver cancer, around which a number of anti-HBV-resistant drugs are produced, but none of these drugs address the liver injury problems of all hepatitis B patients, And drug resistance is also one of the difficulties in the prevention and treatment of hepatitis B. Therefore, it is urgent to develop a method capable of completely curing hepatitis B, and the therapeutic vaccine is one of the most promising therapeutic methods. In order to improve the immune efficacy of the hepatitis B therapeutic vaccine, the researchers conducted a large number of vaccine construction methods and different immunization strategies. The use of cytokines with immunopotentiation as a vaccine adjuvant is one of the strategies[1]. Some studies have shown that IL15 can enhance antigen-specific cellular immune response, specific CTL responses, and increase the survival of memory T-lymphocytes[2]. The recombinant plasmid pVR-S, the recombinant adenovirus rAdv-S and the recombinant poxvirus rMVA-S, which express the HBsAg gene of the hepatitis B virus, are selected to be combined into different immune strategies, and the recombinant adenovirus rAdv-S and the recombinant poxvirus rMVA-S are combined into different immune strategies, and the pVR-IL15 gene adjuvant is used for immunizing to study the effect of the recombinant adenovirus rMVA-S on the immune response level induced by different immune strategies. The results of the experiments show that in the humoral immune response, the pVR-IL15 gene adjuvant can enhance the humoral immune response induced by all the immune strategies other than the individual immune-recombinant viral strategy in this study. The humoral immune response level induced by rAdv-S is higher than that of rMVA-S in the strategy of single-immune recombinant virus, one-time immune pVR-S and one-time immune recombinant virus, two immunopVR-S and one-time immune recombinant virus. The humoral immune effects induced by the three kinds of immune strategies are two immune pVR-S and one-time immune-recombination virus strategy, one-time immune pVR-S and one-time immune-recombination virus strategy, and the strategy of the recombinant virus is separately immunized. The level of humoral immune response induced by rMVA-S was lower than that of cross-immunized rAdv-S and rMVA-S. The results of cellular immune response indicate that the pVR-IL15 gene adjuvant can enhance the level of immune response induced by all the immune strategies in the experiment. The results of the two-time recombinant virus strategy showed no difference in the cellular immune response induced by the immune-homologous vector virus and the heterologous vector virus, and there was no difference in the level of the cellular immune response induced by the one-time immune pVR-S and one-time immune-recombination virus strategy and the two-time recombinant virus strategy. The level of cellular immune response induced by two immune pVR-S and two immune-recombinant virus strategies is the best in each group of immune strategies. on the whole, the pVR-IL15 gene adjuvant can enhance the humoral immune response induced by the recombinant virus in each mouse immune scheme, The highest immune response level of pVR-IL15 gene adjuvant can be increased by 3.6 times. The immune response induced by rAdv-S in humoral immunity was stronger than that of rMVA-S, and the level of humoral immune response induced by rMVA-S was lower than that of rMVA-S and rMVA-S. In cellular immunity, the cellular immune levels induced by the immune-homologous carrier virus and the heterologous vector virus were not different, and the immune response of the primary immune pVR-S and the one-time immune-recombinant virus and the two-time recombinant viral strategy were comparable. Both humoral and cellular immunity show the best immune response induced by the combination of two recombinant plasmids with two recombinant viruses.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R512.62

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本文編號(hào)：2486167