【摘要】：目的對頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中高表達(dá)的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)基因(包括MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、MMP10、MMP12和MMP13)具有激活作用的人類膜蛋白基因進(jìn)行篩選。方法構(gòu)建上述7個備選MMP啟動子報告基因質(zhì)粒。用豆蔻酸佛波酰乙酯(PMA,一種蛋白激酶C激活劑)刺激7個備選MMP啟動子報告基因質(zhì)粒。用雙熒光素酶檢測系統(tǒng)檢測各備選MMP啟動子報告基因質(zhì)粒PMA刺激前的活性及PMA刺激后的活性,以后者除以前者得出各備選MMP啟動子報告基因質(zhì)粒的相對熒光素酶活性值(RLA),RLA最大者選定為MMP啟動子報告基因質(zhì)粒。用人類膜蛋白基因質(zhì)粒庫中的722種質(zhì)粒依次刺激MMP啟動子報告基因質(zhì)粒,刺激前后MMP啟動子報告基因質(zhì)粒RLA均數(shù)超過10確定為對MMP啟動子報告基因質(zhì)�；钚杂忻黠@激活作用的人類膜蛋白基因質(zhì)粒。將篩選出的人類膜蛋白基因質(zhì)粒以相同方法進(jìn)行第二輪篩選,第二輪篩選出的人類膜蛋白基因質(zhì)粒以相同方法進(jìn)行第三輪篩選,最終確定對頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中高表達(dá)的MMP有激活作用的人類膜蛋白基因。結(jié)果PMA刺激后MMP1、MMP2、MMP3、MMP9、MMP10、MMP12、MMP13啟動子報告基因質(zhì)粒的RLA分別為4.53±0.72、1.47±0.28、23.28±1.96、2.37±0.46、8.81±1.35、2.15±0.51、3.47±0.99。MMP3啟動子報告基因質(zhì)粒的RLA明顯高于其他MMP啟動子報告基因質(zhì)粒(P均0.05),被選為MMP啟動子報告基因質(zhì)粒。全部722個質(zhì)粒經(jīng)3輪篩選,確定AXL受體酪氨酸激酶(AXL)、腫瘤壞死因子受體超家族成員10b(TNFRSF10B)和G蛋白耦聯(lián)受體65(GPR65)質(zhì)粒對MMP啟動子報告基因質(zhì)粒均有明顯的激活作用。結(jié)論 GPR65、AXL、TNFRSF10B基因?qū)︻^頸部鱗狀細(xì)胞癌中高表達(dá)的MMP基因有激活作用。
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【作者單位】： 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81670946) 北京市醫(yī)管局臨床醫(yī)學(xué)發(fā)展專項(xiàng)揚(yáng)帆計劃項(xiàng)目(XMLX201507) 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院科研骨干基金項(xiàng)目(2015-YJJ-GGL-002)
【分類號】：R739.91
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本文編號：2466215