發(fā)布時(shí)間：2019-04-22 19:34

【摘要】：為了用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)雞傳染性貧血病毒(CIAV)VP2基因片段,并制備其兔抗血清,試驗(yàn)以CIAV M9905株基因組DNA為模板,通過PCR擴(kuò)增VP2基因,與p ET28a(+)載體連接后轉(zhuǎn)化DH5α獲得陽性重組子,將其轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)菌,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)出His-VP2重組蛋白,經(jīng)Ni-NTA樹脂純化后免疫新西蘭白兔制備兔抗血清,采用IFA和Western-blot檢測該血清的特異性,ELISA測定其效價(jià)。結(jié)果表明:重組His-VP2融合蛋白的分子質(zhì)量約為36 ku,以包涵體形式存在。制備的兔抗VP2血清效價(jià)在1∶6 400以上,可特異性結(jié)合真核表達(dá)的VP2蛋白,表明其反應(yīng)原性較好。說明試驗(yàn)成功表達(dá)VP2蛋白,并制備出兔抗血清,可用于該蛋白與病毒其他蛋白之間的相互作用的進(jìn)一步研究。
[Abstract]:In order to express (CIAV) VP2 gene fragment of chicken infectious anemia virus by E. coli prokaryotic expression system and prepare rabbit antiserum, VP2 gene was amplified by PCR using genomic DNA of CIAV M9905 strain as template. After being ligated with p-ET28a () vector, DH5 偽 was transformed into positive recombinant plasmid, then transformed into E.coli BL21 (DE3) strain. IPTG was induced to express His-VP2 recombinant protein. After purification with Ni-NTA resin, rabbit antiserum was prepared by immunizing New Zealand white rabbits. The specificity of the serum was detected by IFA and Western-blot, and the titer of the serum was determined by ELISA. The results showed that the molecular weight of the recombinant His-VP2 fusion protein was about 36 ku, in the form of inclusion body. The titer of rabbit anti-VP2 serum was more than 1:6 400, which could specifically bind to VP2 protein expressed in eukaryotic cells, which indicated that the antiserum was of good antigenicity. The results indicated that the VP2 protein was successfully expressed and rabbit antiserum was prepared, which could be used for further study of the interaction between the protein and other proteins of the virus.
【作者單位】： 徐州醫(yī)科大學(xué)形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/禽免疫抑制病科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì);徐州醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室/江蘇省免疫與代謝重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家肉雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目(CARS-42-G07) 徐州醫(yī)科大學(xué)優(yōu)秀人才啟動(dòng)基金項(xiàng)目(D2015004)
【分類號】：S852.65

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本文編號：2463134