【摘要】：為了用大腸桿菌原核表達系統(tǒng)表達雞傳染性貧血病毒(CIAV)VP2基因片段,并制備其兔抗血清,試驗以CIAV M9905株基因組DNA為模板,通過PCR擴增VP2基因,與p ET28a(+)載體連接后轉(zhuǎn)化DH5α獲得陽性重組子,將其轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)菌,IPTG誘導(dǎo)表達出His-VP2重組蛋白,經(jīng)Ni-NTA樹脂純化后免疫新西蘭白兔制備兔抗血清,采用IFA和Western-blot檢測該血清的特異性,ELISA測定其效價。結(jié)果表明:重組His-VP2融合蛋白的分子質(zhì)量約為36 ku,以包涵體形式存在。制備的兔抗VP2血清效價在1∶6 400以上,可特異性結(jié)合真核表達的VP2蛋白,表明其反應(yīng)原性較好。說明試驗成功表達VP2蛋白,并制備出兔抗血清,可用于該蛋白與病毒其他蛋白之間的相互作用的進一步研究。
[Abstract]:In order to express (CIAV) VP2 gene fragment of chicken infectious anemia virus by E. coli prokaryotic expression system and prepare rabbit antiserum, VP2 gene was amplified by PCR using genomic DNA of CIAV M9905 strain as template. After being ligated with p-ET28a () vector, DH5 偽 was transformed into positive recombinant plasmid, then transformed into E.coli BL21 (DE3) strain. IPTG was induced to express His-VP2 recombinant protein. After purification with Ni-NTA resin, rabbit antiserum was prepared by immunizing New Zealand white rabbits. The specificity of the serum was detected by IFA and Western-blot, and the titer of the serum was determined by ELISA. The results showed that the molecular weight of the recombinant His-VP2 fusion protein was about 36 ku, in the form of inclusion body. The titer of rabbit anti-VP2 serum was more than 1:6 400, which could specifically bind to VP2 protein expressed in eukaryotic cells, which indicated that the antiserum was of good antigenicity. The results indicated that the VP2 protein was successfully expressed and rabbit antiserum was prepared, which could be used for further study of the interaction between the protein and other proteins of the virus.
【作者單位】： 徐州醫(yī)科大學形態(tài)學實驗教學中心;中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點實驗室/禽免疫抑制病科技創(chuàng)新團隊;徐州醫(yī)科大學病原生物學與免疫學教研室/江蘇省免疫與代謝重點實驗室;
【基金】：國家肉雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項目(CARS-42-G07) 徐州醫(yī)科大學優(yōu)秀人才啟動基金項目(D2015004)
【分類號】：S852.65

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