【摘要】：本研究以珍稀的白甲烏鱧作為研究材料,利用形態(tài)學(xué)、生物學(xué)、組織學(xué)、分子生物學(xué)等方法對(duì)白甲烏鱧和烏鱧進(jìn)行了比較研究,綜合探討了其分類歸屬、皮膚白化特征機(jī)理及其引種養(yǎng)殖過程中的抗應(yīng)激能力等問題。1,基于形態(tài)學(xué)方法的部分鱧屬魚類系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系本章運(yùn)用傳統(tǒng)形態(tài)度量法與框架法對(duì)5種鱧89個(gè)個(gè)體的11個(gè)可數(shù)和29個(gè)可量性狀進(jìn)行了測(cè)量。主成分分析顯示所有5個(gè)主成分的累積貢獻(xiàn)率達(dá)到78.928%。主成分分析散點(diǎn)圖顯示白甲烏鱧和烏鱧重疊最大。聚類分析顯示各種間可完全區(qū)分,其中白甲烏鱧和烏鱧親緣關(guān)系最近。通過X射線攝影發(fā)現(xiàn)白甲烏鱧和烏鱧形態(tài)結(jié)果較為相似。由此可知,白甲烏鱧和烏鱧較為相近,無明顯區(qū)別,雜交鱧也偏向于父本烏鱧。2,基于毛細(xì)管電泳的AFLP標(biāo)記技術(shù)探討部分鱧屬魚類親緣關(guān)系本章采用AFLP-毛細(xì)管電泳技術(shù)研究了8種鱧屬魚類的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系。共篩選出10對(duì)選擇性擴(kuò)增引物組合,擴(kuò)增總條帶范圍為114-206,一致性條帶為0-12,多態(tài)性條帶為114-196。聚類結(jié)果顯示,依相似系數(shù)0.58的水平,烏鱧、白甲烏鱧、雜交鱧和斑鱧聚為一支,且烏鱧和白甲烏鱧的親緣關(guān)系最近,月鱧和帶鱧聚為一支,而線鱧和小盾鱧分別單獨(dú)聚為一支。該技術(shù)能有效區(qū)分鱧屬魚類的親緣關(guān)系,為種質(zhì)資源的開發(fā)利用提供一定的分子佐證材料。3.基于白甲烏鱧線粒體DNA全序列及其12s RNA、Cytb和CO1基因與D-Loop控制區(qū)序列的鱧科魚類系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系本章首先測(cè)定了白甲烏鱧線粒體DNA全基因組序列,全長(zhǎng)16558bp,與烏鱧一致。利用MEGA6.0軟件構(gòu)建鱧科魚類的遺傳距離,其中白甲烏鱧和烏鱧之間的遺傳距離為0.002。采用NJ、ME和ML法分別構(gòu)建分子系統(tǒng)樹,其中白甲烏鱧、烏鱧和烏斑雜交鱧單獨(dú)聚為一支。同時(shí)比較分析了其12s rRNA、Cytb和CO1基因及其D-Loop控制區(qū)序列,白甲烏鱧和烏鱧單倍型序列之間的最大遺傳距離均小于0.010,分別為0.006、0.002、0.002和0.004;分子系統(tǒng)樹顯示它們所有單倍型均單獨(dú)聚為一支,且交叉排列,進(jìn)一步得出白甲烏鱧應(yīng)作為烏鱧白化變異種的結(jié)論。4,白甲烏鱧與烏鱧基本營(yíng)養(yǎng)成分、皮膚黑色素含量及其組織學(xué)分析選取同一養(yǎng)殖水域的白甲烏鱧和烏鱧。分析肌肉基本營(yíng)養(yǎng)成分發(fā)現(xiàn)白甲烏鱧較烏鱧有更高的食用營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,同時(shí)測(cè)定其皮膚黑色素含量顯著低于烏鱧。光學(xué)顯微鏡觀察白甲烏鱧與烏鱧鱗片和皮膚黑色素細(xì)胞在分布、密度、形態(tài)、大小和生長(zhǎng)狀態(tài)等方面存在明顯差異。he和黑色素染色技術(shù)比較觀察皮膚顯微結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)白甲烏鱧皮膚色素層趨于退化,且無明顯黑色素細(xì)胞分布。利用透射電子顯微鏡對(duì)比分析皮膚超微結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)白甲烏鱧皮膚黑色素細(xì)胞的黑色素體密度較小,排列混亂,呈現(xiàn)多種形狀,真皮層的各層細(xì)胞排列不規(guī)則,無層次性�？梢�,黑色素細(xì)胞和黑色素沉積的缺乏、黑色素體密度較小等是導(dǎo)致白甲烏鱧皮膚白化現(xiàn)象的組織學(xué)原因。5,白甲烏鱧酪氨酸酶(tyr)基因的克隆,表達(dá)及其分子特征克隆了白甲烏鱧和烏鱧tyr基因cdna全長(zhǎng),兩者序列一致。同源比對(duì)發(fā)現(xiàn),與硬骨魚類相似性較高,而與細(xì)菌類相似度較低。相對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量pcr結(jié)果顯示tyr基因在白甲烏鱧和烏鱧9大組織(皮膚、眼睛、肌肉、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、鰓和腸道)中均有表達(dá)。其中,白甲烏鱧眼睛組織表達(dá)量最高,而烏鱧皮膚組織的表達(dá)量最高。對(duì)比相同組織發(fā)現(xiàn),烏鱧皮膚組織tyr基因表達(dá)量極顯著高于白甲烏鱧(18.66倍)。細(xì)胞免疫熒光觀察亞細(xì)胞定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體、細(xì)胞質(zhì)膜等部位,與預(yù)測(cè)結(jié)果一致�？梢�,tyr基因可能作為參與烏鱧皮膚黑色素細(xì)胞發(fā)育、分化和功能調(diào)節(jié)的重要因子,其低表達(dá)是皮膚出現(xiàn)白化特征的關(guān)鍵因素之一。6,白甲烏鱧小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(mitf)基因的克隆,表達(dá)及其分子特征分析克隆了白甲烏鱧和烏鱧mitf基因cdna全長(zhǎng),兩者序列一致。同源比對(duì)發(fā)現(xiàn),與硬骨魚類相似性較高,而與昆蟲類相似性較低。相對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量pcr結(jié)果顯示mitf基因在白甲烏鱧心臟組織表達(dá)量最高,而在烏鱧肌肉組織表達(dá)量最高。對(duì)比相同組織發(fā)現(xiàn),烏鱧皮膚mitf基因表達(dá)量極顯著高于白甲烏鱧(8.77倍)。細(xì)胞免疫熒光觀察亞細(xì)胞主要定位于細(xì)胞核,與預(yù)測(cè)結(jié)果一致�？梢�,mitf基因可能作為參與白甲烏鱧皮膚體色調(diào)控,其低表達(dá)可能與皮膚出現(xiàn)白化特征密切相關(guān)。7,白甲烏鱧sox10基因的克隆,表達(dá)及其分子特征分析克隆了白甲烏鱧和烏鱧sox10基因cdna全長(zhǎng),兩者序列一致。同源比對(duì)發(fā)現(xiàn),與硬骨魚類的相似性較高,而與其它脊椎動(dòng)物相似性較低。相對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量pcr結(jié)果顯示sox10基因在白甲烏鱧眼睛組織的表達(dá)量最高,而在烏鱧皮膚組織中表達(dá)量最高。對(duì)比相同組織發(fā)現(xiàn),烏鱧皮膚sox10基因表達(dá)量極顯著高于白甲烏鱧(14.44倍)。細(xì)胞免疫熒光觀察亞細(xì)胞主要定位于細(xì)胞核,與預(yù)測(cè)結(jié)果一致�？梢�,sox10基因可能參與白甲烏鱧體色調(diào)節(jié),其低表達(dá)是皮膚出現(xiàn)白化特征的重要因素之一。8,白甲烏鱧hsp60基因的克隆,表達(dá)及其分子特征分析克隆了白甲烏鱧hsp60基因cdna和基因組dna全長(zhǎng),符合hsp60基因家族的特征。同源比對(duì)發(fā)現(xiàn),與硬骨魚類相似性極高,而與細(xì)菌類的相似性較低。相對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)正常對(duì)照組(0h)HSP60基因的表達(dá)存在顯著組織特異性。相比于常溫處理組(26℃),經(jīng)熱處理(37℃)后的白甲烏鱧腦、腎臟、肝臟和脾臟組織HSP60基因的表達(dá)量均極顯著的升高,而低溫處理組(8.5℃)除腦組織表現(xiàn)出極顯著性降低外,其他組織均無顯著差異。注射遲緩愛德華氏菌(Edwardsiella tarda)(菌株NO.DL1476)不同時(shí)間(0-,6-,12-,24-,36-,48-,72h)后的HSP60基因在白甲烏鱧大腦、脾臟和腎臟組織中不同時(shí)間均出現(xiàn)極顯著的升高;在肝臟中一直處于高表達(dá)狀態(tài)�？梢�,HSP60基因在應(yīng)對(duì)外界不良環(huán)境因子、維持機(jī)體穩(wěn)態(tài)、保證正常生命活動(dòng)起到重要調(diào)節(jié)作用。9,白甲烏鱧HSP70基因的克隆,表達(dá)及其分子特征分析克隆了白甲烏鱧HSP70基因cDNA和基因組DNA全長(zhǎng),符合HSP70基因家族的特征。同源比對(duì)發(fā)現(xiàn),與所用物種相似性均很高。相對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)正常對(duì)照組四大組織的表達(dá)存在高度特異性。相比于常溫處理組,熱處理后的四大組織HSP70基因均表現(xiàn)出極顯著的升高,而低溫處理組均無顯著差異。經(jīng)過注射遲緩愛德華氏菌不同時(shí)間后的四大組織均出現(xiàn)極顯著的升高。結(jié)果說明HSP70基因在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)及保護(hù)其致病的過程中發(fā)揮極其重要的作用。10,白甲烏鱧HSP90基因的克隆,表達(dá)及其分子特征分析克隆了白甲烏鱧HSP90基因cDNA和基因組DNA全長(zhǎng),符合HSP90基因家族的特征。同源比對(duì)發(fā)現(xiàn),與硬骨魚綱的魚類相似性很高,而與細(xì)菌類相似性較低。相對(duì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR發(fā)現(xiàn)正常對(duì)照組四大組織存在特異性表達(dá)。相比于常溫處理組,熱處理后的四大組織HSP90基因均表現(xiàn)極顯著升高,而低溫處理組均無顯著性差異。經(jīng)過遲緩愛德華氏菌注射不同時(shí)間后的四大組織均出現(xiàn)了極顯著的升高,在肝臟組織中一直呈現(xiàn)高表達(dá)�？梢�,HSP90基因能夠有效的應(yīng)對(duì)熱應(yīng)激和病原菌感染,對(duì)正常生命活動(dòng)起到重要的調(diào)節(jié)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S965.199

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 楊晶晶;張妍;張文術(shù);陳瑋彤;金萬昆;陳成勛;董仕;;線鱗型黃金鯽(框鱗鏡鯉♀X紅鯽♂)mtDNA及同工酶的遺傳分析[J];河北漁業(yè);2015年09期

2 陳杰;李福貴;黃創(chuàng)新;蔣霞云;鄒曙明;;不同鳊魴屬魚類群體的形態(tài)差異分析[J];上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào);2014年03期

3 馬得友;楊紅生;孫麗娜;陳慕雁;;Transcription profiling using RNA-Seq demonstrates expression differences in the body walls of juvenile albino and normal sea cucumbers Apostichopus japonicus[J];Chinese Journal of Oceanology and Limnology;2014年01期

4 曲朦;施曉峰;張之文;丁少雄;;赤點(diǎn)石斑魚HSP60基因克隆及弧菌應(yīng)激前后的組織表達(dá)特性分析[J];海洋學(xué)報(bào)(中文版);2011年01期

5 翟會(huì)芳;江幸福;羅禮智;;甜菜夜蛾HSP90基因克隆及高溫脅迫下其表達(dá)量的變化[J];昆蟲學(xué)報(bào);2010年01期

6 劉麗;余紅心;肖維;陳湘藝;曾春芳;;魚肉品質(zhì)的研究進(jìn)展[J];內(nèi)陸水產(chǎn);2008年08期

7 楊淞;葉星;盧邁新;黃樟翰;白俊杰;;橙色莫桑比克羅非魚和荷那龍羅非魚的AFLP分析[J];中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年06期

8 李韜;;AFLP標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展和完善[J];生物工程學(xué)報(bào);2006年05期

9 陳志強(qiáng),鄧學(xué)梅,周軍,李寧,吳常信;雞的酪氨酸酶基因5~′調(diào)控區(qū)的單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2005年02期

10 程起群,李思發(fā);刀鱭和湖鱭種群的形態(tài)判別[J];海洋科學(xué);2004年11期

，

本文編號(hào)：2462941