【摘要】：對生防菌吡咯伯克霍爾德氏菌JK-SH007基因組上高GC基因PCR擴增體系進(jìn)行探討。通過對該菌株基因組進(jìn)行100℃處理5 min;PCR反應(yīng)體系為10μL,在體系中使用高保真LA Taq(Mix)酶,并分別加入不同體積分?jǐn)?shù)的DMSO、2×GC bufferⅠ、2×GC bufferⅡ,然后選用適當(dāng)?shù)腜CR程序?qū)Ξa(chǎn)幾丁質(zhì)酶基因(bcc1,GC含量71.1%)進(jìn)行擴增,在此基礎(chǔ)上,選擇最適體系對產(chǎn)ACC脫氨酶基因(acd S,GC含量66.86%)、內(nèi)切葡聚糖酶基因(GC含量74.71%)、色氨酸單加氧酶基因(iaa M,GC含量6.62%)、嗜鐵素合成相關(guān)基因(cepR,GC含量64.44%)進(jìn)行PCR擴增,將擴增出的片段與PMD湫19-T vector連接后轉(zhuǎn)化至大腸桿菌JM-109中進(jìn)行測序。結(jié)果表明:JK-SH007菌株基因組經(jīng)高溫處理后,在PCR反應(yīng)體系中加入10%DMSO可成功擴增出該菌株bcc1基因(2 484 bp)。該體系同樣適用于acd S、內(nèi)切葡聚糖酶、iaa M、cepR等基因,而且測序結(jié)果與預(yù)期的序列一致。因此,該體系具有廣泛性,而且簡單可靠,成本低,擴增效率高,具有很強的實用性,為洋蔥伯克霍爾德氏菌群菌株及其他菌株高GC含量基因的克隆提供了參考依據(jù)。
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【作者單位】： 山西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;長治學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)系;南京林業(yè)大學(xué)林學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31470645,31270884)
【分類號】：Q933

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本文編號：2458047