【摘要】：山韭為百合科多年生的野生蔥屬植物,是中國傳統(tǒng)藥材,其有效的藥用成分具有抗病原微生物、抗氧化、抗腫瘤、降血壓、降血脂、降血糖、抗血小板聚集以及護肝等生理學功能,而這藥用成分主要是蒜素。蒜素是通過蒜氨酸酶與蒜氨酸發(fā)生反應而產(chǎn)生的有機硫化物之一,因此克隆及分析蒜氨酸酶基因,不僅為該酶的進一步研究提供一定的理論依據(jù),同時,為蒜素在醫(yī)藥領域的工業(yè)生產(chǎn)應用奠定了基礎。1本研究以山韭為實驗材料,進行山韭蒜氨酸酶(暫命名為AsALy1)基因cDNA序列的克隆、表達量分析以及生物信息學分析。具體研究方法:利用RT-PCR技術克隆AsALy1基因和山韭actin基因的保守區(qū)序列;利用RACE技術克隆As ALy1基因的3'/5'端未知序列和ORF序列,并通過電子拼接得到AsALy1基因的全長cDNA序列;通過實時熒光定量PCR技術對AsALy1基因在山韭不同組織中表達量進行分析;運用生物信息學分析As ALy1基因的氨基酸序列。研究結果:克隆出的AsALy1基因保守區(qū)片段的長度為862 bp;利用RACE技術獲得了長度為1655 bp的AsALy1基因的全長cDNA;利用生物信息軟件分析表明,其開放閱讀框(ORF)長度為1440 bp,編碼479個氨基酸的蛋白質,相對分子質量為54950.82 Da,理論等電點為8.75;預測As ALy1蛋白在13 32位氨基酸之間有個跨膜區(qū);二級結構主要由α螺旋、隨機卷曲和β折疊鏈組成;預測的蒜氨酸酶具有天冬氨酸氨基轉移酶超家族結構域、C-末端的催化結構域、類表皮生長因子結構域以及天冬氨酸/蛋氨酸/酪氨酸轉氨酶結構域;預測該蛋白質具有絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸三種磷酸化位點和N-糖基化位點�？寺〕龅纳骄耡ctin基因保守區(qū)片段的長度為386 bp;經(jīng)過實時熒光定量PCR技術得出AsALy1基因在莖中的表達量分別是花、葉和種子的0.7倍、36倍和157倍,而AsALy1基因在根中幾乎不表達,表明該酶是鱗莖蒜氨酸酶。
[Abstract]:Chinese chive is a perennial wild Allium plant of Liliaceae. It is a traditional Chinese medicine. Its effective medicinal ingredients are anti-pathogenic microorganism, anti-oxidation, anti-tumor, lowering blood pressure, lowering blood lipid, lowering blood sugar. Antiplatelet aggregation and liver protection and other physiological functions, and this medicinal ingredient is mainly allicin. Alliin is one of the organic sulfides produced by the reaction of alliinase with alliinic acid. Therefore, cloning and analyzing alliinase gene not only provides a theoretical basis for further study of alliinase, but also provides a theoretical basis for further study of alliinase. In this study, the cDNA sequence of alliinase gene (tentatively named AsALy1) was cloned, expressed and bioinformatics were analyzed. Methods: the conserved regions of AsALy1 gene and actin gene were cloned by RT-PCR. The unknown and ORF sequences of As ALy1 gene were cloned by RACE technique, and the full-length cDNA sequence of AsALy1 gene was obtained by electronic splicing, and the expression of AsALy1 gene in different tissues was analyzed by real-time fluorescence quantitative PCR technique. The amino acid sequence of As ALy1 gene was analyzed by bioinformatics. Results: the length of the conserved region of the cloned AsALy1 gene was 862 bp;. The full-length cDNA; of the AsALy1 gene with the length of 1655 bp was obtained by RACE technique. The analysis of bioinformatics software showed that the open reading frame (ORF) length was 1440 bp, and the relative molecular weight was 54950.82 Da, theoretical isoelectric point was 8.75; It is predicted that the As ALy1 protein has a transmembrane region between the amino acids of 13 and 32, and the secondary structure is mainly composed of 偽 helix, random crimp and 尾 -fold chain. The predicted alliinase has superfamily domain of aspartate aminotransferase, catalytic domain of C-terminal, epidermal growth factor domain and aspartate / methionine / tyrosine transaminase domain. It was predicted that the protein had three phosphorylation sites, serine, threonine and tyrosine, and N-glycosylation sites. The length of the conserved fragment of actin gene was 386 bp;. The results of real-time fluorescence quantitative PCR showed that the expression of AsALy1 gene in stem was 0.7 times, 36 times and 157 times as much as that in flower, leaf and seed, while AsALy1 gene was almost not expressed in root, which indicated that AsALy1 gene was alliinase in bulb.
【學位授予單位】：內(nèi)蒙古師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：Q943.2;S567.239

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 ;大蒜素防治下痢、腹瀉效果顯著[J];養(yǎng)殖與飼料;2015年03期

2 陳永東;邵中夫;;大蒜素前藥對食管癌細胞Eca9706增殖及凋亡基因表達的影響分析[J];中國生化藥物雜志;2014年07期

3 廖靜靜;劉屹湘;楊敏;張_g;何霞紅;朱書生;;大蒜揮發(fā)物和浸提液對辣椒疫霉菌的抑菌活性分析[J];云南農(nóng)業(yè)大學學報(自然科學);2014年03期

4 林真亭;;大蒜素的提取及體外抗菌活性觀察[J];海峽藥學;2014年04期

5 陳思羽;曹紅;李炳奇;李衛(wèi);王彩霞;康標;謝雨涵;;海藻酸鈉微球固定洋蔥蒜氨酸酶的研究[J];食品工業(yè);2013年01期

6 徐玲;裘雪梅;劉新平;劉仁榮;;蒜氨酸酶基因水平研究進展[J];時珍國醫(yī)國藥;2012年04期

7 付一帆;周宇;李星鑫;劉瑩;王魯峰;潘思軼;;香蔥中蒜氨酸酶的分離純化及其酶學性質[J];食品科學;2012年05期

8 吳曉莉;張婷;邊金鐸;許健;;大蒜鱗莖蒜氨酸酶基因克隆及其在畢赤酵母中的表達[J];中草藥;2012年01期

9 王燁;;大蒜素在養(yǎng)殖業(yè)中的應用[J];新農(nóng)業(yè);2011年09期

10 曾東方;陳玢;曾麟;桓嬌;;大蒜素對三種農(nóng)作物病原真菌的抑制作用[J];湖北農(nóng)業(yè)科學;2011年11期

相關博士學位論文 前2條

1 林辰壹;新疆蔥屬植物資源研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學;2010年

2 鄭國華;大蒜素硒預防胃癌及大蒜油白藜蘆醇誘導胃癌細胞凋亡機理[D];山東大學;2005年

相關碩士學位論文 前6條

1 謝冰心;擬南芥SPO11基因的生物信息學分析[D];鄭州大學;2014年

2 劉巍;呧頭活性物質的提取工藝優(yōu)化及其抗菌抑癌作用的研究[D];湖南師范大學;2011年

3 周銀波;蔥白超臨界CO_2萃取物化學成分分析及酶解對蔥白含硫化合物影響的研究[D];華中科技大學;2008年

4 包薩如拉;內(nèi)蒙古野生蔥屬（Allium L.）植物的民族植物學研究[D];內(nèi)蒙古師范大學;2007年

5 秦曉春;蒜氨酸酶的分離純化及其酶學性質研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2004年

6 柏建山;蔥屬植物—呧頭中抗菌抑癌活性成分的分離純化、鑒定及功能研究[D];湖南師范大學;2004年

，

本文編號：2428208