【摘要】：視神經(jīng)脊髓炎(neuromyelitis optica,NMO)于1894年由Devic首次描述,又稱Devic病或Devic綜合征,是一種累及視神經(jīng)及脊髓的炎性脫髓鞘疾病,發(fā)病機制尚不明確。臨床呈進行性或緩解與復發(fā)病程,曾一度被認為是MS的亞型,直至特異性抗體水通道蛋白4(AQP4)抗體,即NMO-Ig G的發(fā)現(xiàn),2007年Wingerchuk提出視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorders,NMOSD)這一概念,并將NMO-Ig G陽性作為必要條件之一。隨著后續(xù)研究的展開人們對NMOSD的認識逐漸豐滿,2015年國際NMO診斷小組修定了新的診斷標準,并將NMO及NMOSD統(tǒng)一命名為NMOSD。干擾素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)由活化的T細胞和NK細胞產(chǎn)生,又名巨噬細胞活化因子,是Ⅱ型干擾素的唯一成員,具有免疫調(diào)節(jié)的特性,可參與機體的炎癥反應誘導免疫應答。人類IFN-γ基因位于染色體12q24.1,含有4個外顯子和3個內(nèi)含子,長約5.4kb。近年來一些研究表明IFN-γ可能與NMOSD的發(fā)病有關,參與NMOSD患者機體的免疫調(diào)節(jié)。IFN-γ第一內(nèi)含子區(qū)SNP位點rs2430561(A/T)及第三內(nèi)含子區(qū)SNP位點rs2234685(A/G)具有基因多態(tài)性,且rs2430561位點與IFN-γ的生成關系密切。研究表明rs2430561位點基因多態(tài)性與MS的發(fā)病不相關,rs2234685位點基因多態(tài)性與MS發(fā)病相關。但尚無相關研究報道上述兩位點基因多態(tài)性是否與NMOSD易患性相關。因此,有必要從分子生物學角度對IFN-γrs2430561及rs2234685兩位點基因多態(tài)性及其與NMOSD的相關性作以下討論。目的:1從分子生物學角度研究NMOSD易患性與IFN-γ第一內(nèi)含子區(qū)rs2430561和第三內(nèi)含子區(qū)rs2234685兩位點基因多態(tài)性的相關性,探討其在NMOSD疾病中的作用。2研究NMOSD患者血清中IFN-γ水平的變化,探討IFN-γ在NMOSD發(fā)病中的作用。3探討NMOSD患者IFN-γ基因多態(tài)性與急性期IFN-γ水平、EDSS評分、急性期與緩解期EDSS分值差、體重指數(shù)、發(fā)病次數(shù)、病程等之間的關系,進一步探索其在NMOSD發(fā)病中的作用。4分析急性期IFN-γ水平與EDSS評分、初次發(fā)病年歲、體重指數(shù)、病程、發(fā)病次數(shù)之間的相關性。5分析EDSS評分及EDSS分值差與IFN-γ水平之間的相關性,分析EDSS評分與發(fā)病次數(shù)、初次發(fā)病年歲、病程、體重指數(shù)之間的相關性。6分析各基因型NMOSD患者相關臨床資料(性別、AQP4陽性的分布、EDSS評分、初次發(fā)病年歲、發(fā)病次數(shù)、體重指數(shù))有無差別。方法:1病例組:選擇50例NMOSD患者,均符合2015年由Wingerchuk等人制定的NMOSD診斷標準,并詳細記錄病程、發(fā)病次數(shù)、EDSS評分、家族史、誘發(fā)因素、輔助檢查(VEP、核磁共振成像、腦脊液及血清AQP4抗體)等臨床資料。對照組:選擇60例無血緣關系的健康人,年齡、性別均與病例組匹配,近期無感染、未應用免疫抑制劑;2抽取研究對象清晨空腹肘靜脈血,并用EDTA抗凝,三天內(nèi)用樹脂型TM基因組DNA提取試劑盒(純化樹脂、GN結合液、漂洗液)按步驟提取基因組DNA;3采用基因測序的方法對IFN-γ基因SNP位點rs2430561、rs2234685進行檢測;4從血液標本中分離血清,應用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫(ELISA)方法測定血清中IFN-γ的水平;5對NMOSD患者分別進行EDSS評分、初次發(fā)病年歲、病程、發(fā)病次數(shù)、體重指數(shù)等臨床資料收集;6應用SPSS 21.0統(tǒng)計軟件進行分析。病例組和對照組基因型的分布經(jīng)哈迪-溫伯格平衡檢驗,證明有群體代表性。IFN-γ基因型、等位基因數(shù)、性別用直接計數(shù)法計數(shù),計算各等位基因及基因型頻率,組間比較用X2檢驗。IFN-γ水平、EDSS評分、年齡、病程、發(fā)病次數(shù)以及體重指數(shù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示,兩組間比較用t檢驗,多組間比較用單因素方差分析或非參數(shù)檢驗。采用雙變量相關與回歸分析檢驗EDSS評分與IFN-γ急性期和緩解期水平、年齡、病程、發(fā)病次數(shù)、體重指數(shù)間的相關性。顯著檢驗水準為P0.05。結果:1各組間血清IFN-γ水平比較急性期NMOSD組IFN-γ水平(14.9892±5.1227)pg/ml與健康對照組(8.1623±7.8878)pg/ml比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);急性期NM OSD組IFN-γ水平(14.9892±5.1227)pg/ml與緩解期NMOSD組(7.4697±5.6612)pg/ml比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);緩解期NMOSD組IFN-γ水平(7.4697±5.6612)pg/ml與健康對照組(8.1623±7.8878)pg/ml比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。2各組基因型分布的哈迪-溫伯格(Hardy-Weinberg)平衡檢驗1)IFN-γsnp位點rs2234685未檢測到突變基因型,110例均為AA純合子。2)NMOSD組及健康對照組IFN-γsnp位點rs2430561基因型頻率經(jīng)檢驗,符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。3各組間基因型分布和等位基因頻率的比較1)IFN-γsnp位點rs2234685未檢測到突變基因型,110例均為AA純合子。2)IFN-γrs2234685位點基因型分布:NMOSD組與健康對照組比較無顯著差異(P0.05);該位點A及T等位基因頻率:NMOSD組與健康對照組比較無顯著差異(P0.05)。4 IFN-γ各基因型與NMOSD組臨床資料間的關系IFN-γ各基因型與NMOSD組EDSS評分組間比較,TT與AT差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),TT與AA、AT與AA比較差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05);IFN-γ各基因型組與NMOSD組急性期與緩解期EDSS分值差、AQP4陽性率、性別、初次發(fā)病年歲、病程、發(fā)病次數(shù)、體重指數(shù)BMI進行組間比較,差異均無統(tǒng)計學意義(P0.05)。5 NMOSD組急性期與緩解期EDSS評分間的關系NMOSD組急性期EDSS評分(4.24±2.32)與緩解期EDSS評分(3.21±1.96)間比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。6臨床統(tǒng)計資料的相關性及回歸性比較EDSS評分與病程、初次發(fā)病年歲、發(fā)病次數(shù)、體重指數(shù)呈正相關(P0.05)。7病毒感染、妊娠等可能為NMOSD的誘因。結論:1 50例NMOSD患者IFN-γ第三內(nèi)含子區(qū)snp位點rs2234685均為AA純合子基因型,IFN-γrs2234685位點可能與NMOSD易感性不相關。2 IFN-γ第一內(nèi)含子區(qū)snp位點rs2430561可能與NMOSD易感性不相關。3 NMOSD組急性期IFN-γ水平急劇升高,隨著病情好轉至緩解期IFN-γ水平恢復至正常水平,表明在NMOSD的發(fā)病過程中IFN-γ起促進作用。4 IFN-γ基因多態(tài)性與急性期IFN-γ水平、EDSS評分、急性期與緩解期EDSS分值差、AQP4陽性率、性別、初次發(fā)病年歲、體重指數(shù)、病程、發(fā)病次數(shù)等均無顯著相關性。5 IFN-γ水平與EDSS評分無顯著相關性;急性期IFN-γ水平與初次發(fā)病年歲、體重指數(shù)、病程、發(fā)病次數(shù)均無顯著相關性。6 EDSS評分與病程、體重指數(shù)、初次發(fā)病年歲及發(fā)病次數(shù)呈正相關。7病毒感染、妊娠等可能為NMOSD的誘因。
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【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R744.52

【參考文獻】

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1 龔靖;唐玉蘭;;中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘患者NMO-IgG與細胞因子的變化[J];健康之路;2016年05期

2 何洋;劉廣志;高旭光;;水通道蛋白4抗體與神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫病[J];中華內(nèi)科雜志;2011年03期

3 楊揚;黃德暉;吳衛(wèi)平;;中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性脫髓鞘患者血清AQP-4抗體與細胞因子的研究[J];中國神經(jīng)免疫學和神經(jīng)病學雜志;2010年02期

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本文編號：2427354