【摘要】：本試驗(yàn)采用反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)和c DNA末端快速擴(kuò)增(RACE)技術(shù)從半滑舌鰨肝臟中克隆了乙酰輔酶A羧化酶α(ACC1)基因全長c DNA,并采用實(shí)時熒光定量PCR方法對半滑舌鰨ACC1基因在腸道、肝臟、肌肉、卵巢、脾臟、全腦、腎臟、心臟、腸系膜脂肪等組織中的表達(dá)進(jìn)行了研究;此外,還研究了飼料脂肪水平對半滑舌鰨肝臟中ACC1基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明:1)半滑舌鰨ACC1基因c DNA全長7 811 bp,含1個7 074 bp的開放閱讀框,編碼2 357個氨基酸,ACC1蛋白計算分子質(zhì)量為266 ku,等電點(diǎn)為6.42。半滑舌鰨ACC1氨基酸序列保守位點(diǎn)包括1個ATP結(jié)合位點(diǎn)(Gly~(316)~Gly~(321))、1個生物素結(jié)合位點(diǎn)(Val~(785)-Met~(786)-Lys~(787)-Met~(788))、1個輔酶A結(jié)合位點(diǎn)(Ser~(1969)~Val~(1995))。此外,半滑舌鰨ACC1基因存在可變剪接,形成另外2個同工型(isoforms),與分子質(zhì)量為266 ku的ACC1相比,分別少8和15個氨基酸。2)半滑舌鰨所有組織中均檢測到ACC1基因的表達(dá),肝臟和全腦中ACC1 mRNA相對表達(dá)量顯著高于其他組織(P0.05),分別為2.67和2.53;腸道、腸系膜脂肪和卵巢中次之,分別為1.14、1.10和0.97;腎臟中最低,僅為0.48。3)與對照組(未添加魚油組)相比,3.5%魚油組肝臟中A CC1 mRNA相對表達(dá)量顯著降低(P0.05);7.0%和10.0%魚油組肝臟中A CC1 mRNA相對表達(dá)量進(jìn)一步降低,顯著低于3.5%組和對照組(P0.05),同時10.0%魚油組低于7.0%魚油組(P0.05)。綜上,本試驗(yàn)克隆出了半滑舌鰨ACC1基因的全長c DNA,并得出半滑舌鰨ACC1蛋白的主要功能位點(diǎn)為ATP結(jié)合位點(diǎn)、生物素結(jié)合位點(diǎn)、輔酶A結(jié)合位點(diǎn),與其他脊椎動物相比基本保守。半滑舌鰨ACC1基因主要在肝臟和全腦等生脂組織中表達(dá),飼料中添加魚油顯著抑制其肝臟中ACC1基因的表達(dá),且抑制作用與魚油添加量呈正相關(guān)。
[Abstract]:In this study, the full length c DNA, of acetyl coA carboxylase 偽 (ACC1) gene was cloned from liver of Cynoglossus semilaevis by reverse transcription PCR (RT-PCR) and rapid amplification of (RACE) at the end of c DNA. The expression of ACC1 gene in intestine, liver, muscle, ovary, spleen, whole brain, kidney, heart and mesenteric fat was studied by real-time fluorescence quantitative PCR. In addition, the effect of dietary fat level on the expression of ACC1 gene in liver of Cynoglossus semilaevis was studied. The results showed that: 1) c DNA of Cynoglossus semilaevis ACC1 gene had a 7 811 bp, open reading frame of 7 074 bp, encoding 2 357 amino acids, and the calculated molecular weight of ACC1 protein was 266 ku, isoelectric point 6.42. The conserved amino acid sequence of ACC1 of Cynoglossus semilaevis includes one ATP binding site (Gly~ (316) ~ Gly~) (321),) and one biotin binding site (Val~ (785) -Met~ (786) -Lys~ (787) -Met~ (788),). A CoA binding site (Ser~ _ (1969) ~ Val~ (1995).) In addition, there was variable splicing in ACC1 gene of Cynoglossus semilaevis. The expression of ACC1 gene was detected in all tissues of Cynoglossus semilaevis compared with ACC1 with molecular weight of 266 ku. The relative expression of ACC1 mRNA in liver and brain was significantly higher than that in other tissues (P0.05), which were 2.67 and 2.53 respectively. The intestinal tract, mesenteric fat and ovary were 1.141.10 and 0.97 respectively. Compared with the control group (no fish oil group), the relative expression of A CC1 mRNA in the liver of 3.5% fish oil group was significantly lower than that in the control group (P 0.05). The relative expression of A CC1 mRNA in the liver of 7.0% and 10.0% fish oil groups was significantly lower than that of 3.5% group and control group (P0.05), while that of 10.0% fish oil group was lower than that of 7.0% fish oil group (P0.05). In conclusion, the full-length c DNA, of ACC1 gene of Cynoglossus semilaevis was cloned and the main functional sites of ACC1 protein were ATP binding site, biotin binding site and coenzyme A binding site, which were conserved compared with other vertebrates. The ACC1 gene of Cynoglossus semilaevis was mainly expressed in lipids and lipids of the whole brain. Fish oil supplementation significantly inhibited the expression of ACC1 gene in the liver, and the inhibitory effect was positively correlated with the amount of fish oil added.
【作者單位】： 淮海工學(xué)院;江蘇省海洋生物產(chǎn)業(yè)技術(shù)協(xié)同創(chuàng)新中心;浙江省淡水水產(chǎn)研究所;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31272636) 江蘇省高校自然科學(xué)研究重大項(xiàng)目(10KJA240002) 江蘇省自然科學(xué)基金(BK2012664) 江蘇省海洋生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金(2009HS15) 浙江省重大科技專項(xiàng)(2012C12907-2) 江蘇省優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程項(xiàng)目(PAPD) 國家科技支撐計劃(2012BAD26B04-04)
【分類號】：S917.4

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本文編號：2394312