【摘要】：為了比較和探索SB(sleeping beauty)、PB(piggy Bac)和Tol2 3種轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)下的細(xì)胞質(zhì)顯微注射法在小鼠(Mus musculus)和斑馬魚(Danio rerio)上的轉(zhuǎn)基因效率,本研究將包含3種轉(zhuǎn)座子的重組載體p T3-PST-CAG-GFP分別與3種轉(zhuǎn)座酶表達載體以1∶1質(zhì)量比混合,顯微注射至小鼠和斑馬魚受精卵細(xì)胞質(zhì),經(jīng)體外培養(yǎng)后在胚胎發(fā)育不同時期用熒光顯微鏡檢測報告基因綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)陽性率,結(jié)果顯示,在培養(yǎng)至4 Ed(96 h)(Ed:embryo day,胚胎發(fā)育的天數(shù))的小鼠胚胎中,PB轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的GFP轉(zhuǎn)基因陽性率最高,達52%(N=281),顯著高于SB的47%(N=328)和Tol2的36%(N=273)(P0.05);而受精后36和60 h(hour past fertilization,hpf)斑馬魚胚胎中,熒光顯微鏡檢測表明,Tol2的GFP陽性率分別為36%(N=677)和37%(N=685),顯著高于SB(28%N=691和27%N=708)和PB(30%N=687和32%N=675)(P0.05);轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的細(xì)胞質(zhì)顯微注射可獲得較高的轉(zhuǎn)基因效率,且轉(zhuǎn)座子活性具有物種差異性,在哺乳動物胚胎中PB轉(zhuǎn)座子的基因轉(zhuǎn)移效率最高,而在魚類胚胎中Tol2轉(zhuǎn)座子的基因轉(zhuǎn)移效率最高。本研究為提高動物轉(zhuǎn)基因效率研究提供重要參考資料。
[Abstract]:To compare and explore the transgene efficiency of three transposon-mediated cytoplasmic microinjection methods (SB (sleeping beauty), PB (piggy Bac) and Tol2) on mouse (Mus musculus) and zebrafish (Danio rerio). In this study, the recombinant vector p T3-PST-CAG-GFP containing three transposons was mixed with three transposase expression vectors at 1:1 mass ratio and microinjected into the zygote cytoplasm of mouse and zebrafish fertilized eggs. The positive rate of green fluorescent protein (green fluorescent protein,GFP) was detected by fluorescence microscope at different stages of embryonic development after in vitro culture. The results showed that the positive rate of green fluorescent protein (GFP) was 4 Ed (96 h) (Ed:embryo day,) in vitro. The positive rate of PB transposon mediated GFP was the highest (52%), which was significantly higher than that of SB (47%) and Tol2 (36%) (P0.05). However, in zebrafish embryos at 36 and 60 h (hour past fertilization,hpf after fertilization, the positive rates of GFP in Tol2 were 36% (Nf677) and 37% (Nf685), respectively. It was significantly higher than SB (28%N=691 and 27%N=708) and PB (30%N=687 and 32%N=675) (P0.05). Transposon mediated cytoplasmic microinjection could obtain higher transgene efficiency, and the transposon activity was different in species, and the gene transfer efficiency of PB transposon was the highest in mammalian embryos. Tol2 transposon has the highest gene transfer efficiency in fish embryos. This study provides an important reference for improving the efficiency of transgenic animals.
【作者單位】： 揚州大學(xué)表觀遺傳學(xué)與表觀基因組學(xué)研究所;揚州大學(xué)動物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國家轉(zhuǎn)基因重大專項重點課題子課題(No.2014ZX08006005-008) 江蘇省產(chǎn)學(xué)研聯(lián)合創(chuàng)新資金-前瞻性聯(lián)合研究項目(No.BY2013063-03) 中國博士后科學(xué)基金(No.20100480371) 江蘇省普通高校學(xué)術(shù)學(xué)位研究生科研創(chuàng)新計劃項目(No.KYLX_1357)
【分類號】：Q78

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【共引文獻】

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本文編號：2390322