【摘要】：將泰澤隱孢子蟲(Cryptosporidium tyzzeri)CP15基因從pMD18-T-CP15重組質(zhì)粒中切下,連接至pET-28a(+)原核表達(dá)載體,經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定正確后,轉(zhuǎn)化到大腸埃希菌BL21(DE3)中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE和Western blot分析,并將純化的重組蛋白免疫ICR小鼠制備多克隆抗體。結(jié)果顯示,重組表達(dá)載體pET-28a-CP15在大腸桿菌中以可溶形式表達(dá),表達(dá)蛋白分子量約為17 kDa。Western blot顯示重組蛋白能被泰澤隱孢子蟲感染小鼠血清所識(shí)別。ELISA結(jié)果顯示重組蛋白免疫小鼠血清能和泰澤隱孢子蟲卵囊可溶性抗原特異性反應(yīng),表明獲得的重組蛋白具有較好的抗原性。
[Abstract]:The (Cryptosporidium tyzzeri) CP15 gene of Cryptosporidium taizei was digested from the recombinant pMD18-T-CP15 plasmid and ligated to the prokaryotic expression vector of pET-28a (). The recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) after restriction endonuclease digestion and sequencing. The expressed product was analyzed by SDS-PAGE and Western blot, and the purified recombinant protein was immunized with ICR mice to prepare polyclonal antibody. The results showed that the recombinant expression vector pET-28a-CP15 was expressed in soluble form in Escherichia coli. The molecular weight of the expressed protein was about 17 kDa.Western blot which showed that the recombinant protein could be recognized by the sera of mice infected with Cryptosporidium taizei. The ELISA results showed that the recombinant protein immunized mice could react specifically with the soluble antigen of Cryptosporidium taizei oocysts. The result showed that the recombinant protein had good antigenicity.
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所農(nóng)業(yè)部動(dòng)物產(chǎn)品質(zhì)量安全生物(性危害因子風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(上海))農(nóng)業(yè)部動(dòng)物寄生蟲學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室;江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;山東英才學(xué)院;
【基金】：上海市科技興農(nóng)重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目(滬農(nóng)科攻字(2015)第1-10號(hào),(2005)第3-4號(hào)) 國家農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估項(xiàng)目(GJFP201600703,GJFP201700703) 國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31302083) 中央級(jí)公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)(2016JB13) 閔行區(qū)高層次人才科研項(xiàng)目團(tuán)隊(duì)資助
【分類號(hào)】：S852.723

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本文編號(hào)：2383505