【摘要】：將泰澤隱孢子蟲(Cryptosporidium tyzzeri)CP15基因從pMD18-T-CP15重組質(zhì)粒中切下,連接至pET-28a(+)原核表達(dá)載體,經(jīng)酶切和測序鑒定正確后,轉(zhuǎn)化到大腸埃希菌BL21(DE3)中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE和Western blot分析,并將純化的重組蛋白免疫ICR小鼠制備多克隆抗體。結(jié)果顯示,重組表達(dá)載體pET-28a-CP15在大腸桿菌中以可溶形式表達(dá),表達(dá)蛋白分子量約為17 kDa。Western blot顯示重組蛋白能被泰澤隱孢子蟲感染小鼠血清所識別。ELISA結(jié)果顯示重組蛋白免疫小鼠血清能和泰澤隱孢子蟲卵囊可溶性抗原特異性反應(yīng),表明獲得的重組蛋白具有較好的抗原性。
[Abstract]:The (Cryptosporidium tyzzeri) CP15 gene of Cryptosporidium taizei was digested from the recombinant pMD18-T-CP15 plasmid and ligated to the prokaryotic expression vector of pET-28a (). The recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) after restriction endonuclease digestion and sequencing. The expressed product was analyzed by SDS-PAGE and Western blot, and the purified recombinant protein was immunized with ICR mice to prepare polyclonal antibody. The results showed that the recombinant expression vector pET-28a-CP15 was expressed in soluble form in Escherichia coli. The molecular weight of the expressed protein was about 17 kDa.Western blot which showed that the recombinant protein could be recognized by the sera of mice infected with Cryptosporidium taizei. The ELISA results showed that the recombinant protein immunized mice could react specifically with the soluble antigen of Cryptosporidium taizei oocysts. The result showed that the recombinant protein had good antigenicity.
【作者單位】： 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所農(nóng)業(yè)部動物產(chǎn)品質(zhì)量安全生物(性危害因子風(fēng)險評估實驗室(上海))農(nóng)業(yè)部動物寄生蟲學(xué)重點開放實驗室;江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;山東英才學(xué)院;
【基金】：上海市科技興農(nóng)重點攻關(guān)項目(滬農(nóng)科攻字(2015)第1-10號,(2005)第3-4號) 國家農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險評估項目(GJFP201600703,GJFP201700703) 國家自然科學(xué)基金項目(31302083) 中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務(wù)費(2016JB13) 閔行區(qū)高層次人才科研項目團(tuán)隊資助
【分類號】：S852.723

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 高正琴,邢進(jìn),王春玲,賀爭鳴,邢瑞昌;實驗大鼠泰澤菌檢測方法的比較研究[J];中國實驗動物學(xué)報;2004年03期

2 張紅法;王桂榮;劉秀娟;;兔泰澤氏菌病病例[J];中國獸醫(yī)雜志;2006年05期

3 韓文瑜;泰澤(Tyzzer)氏病及其防制的研究進(jìn)展[J];動物檢疫;1988年01期

4 邵偉娟,高誠,王勝昌,陳鴻書;大鼠泰澤氏菌套式PCR方法的建立和初步應(yīng)用[J];上海實驗動物科學(xué);2001年02期

5 李通瑞;馬駒的泰澤氏（Tyzzer）病[J];中國獸醫(yī)雜志;1995年01期

6 花象柏;彭吉生;;鴨泰澤球蟲病的診斷和病理組織學(xué)變化的觀察[J];江西畜牧獸醫(yī)雜志;1985年03期

7 史美清,陳淑玉;微小泰澤球蟲裂殖生殖階段蟲體超微結(jié)構(gòu)[J];華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;1989年04期

8 張偉薇;孔繁瑤;;毀滅泰澤球蟲(Tyzzeria perniciosa)的細(xì)胞化學(xué)研究 Ⅱ.核酸、蛋白質(zhì)、堿性磷酸酶[J];北京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;1990年04期

9 D.H.Percy;徐仲鈞;;家兔泰澤(Tyzzer)氏病[J];浙江畜牧獸醫(yī);1985年S1期

10 殷佩云;蔣金書;孔繁瑤;林昆華;范國雄;劉桂英;武軍;楊紅心;;北京鴨毀滅泰澤球蟲Tyzzeria perniciosa內(nèi)生發(fā)育的研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;1983年04期

相關(guān)會議論文 前4條

1 高正琴;邢進(jìn);王春玲;賀爭鳴;邢瑞昌;;實驗大鼠泰澤氏菌檢測方法的比較研究[A];中國實驗動物學(xué)會第六屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2004年

2 羅建輝;王春玲;姚智慧;董關(guān)木;賀爭鳴;邢瑞昌;;泰澤氏菌PCR檢測方法的建立及初步應(yīng)用[A];中國實驗動物學(xué)會第五屆學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2000年

3 羅建輝;王春玲;賀爭鳴;邢瑞昌;;小鼠泰澤氏菌抗體IFA檢測方法的建立及其與ELISA方法的初步比較[A];中國實驗動物學(xué)會青年科技協(xié)會第二屆學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2001年

4 林忠武;;一例番鴨毀滅泰澤球蟲病的診治報告[A];福建省畜牧獸醫(yī)學(xué)會2009年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2009年

，

本文編號：2383505