【摘要】：采用RT-PCR和RACE技術(shù)成功克隆煙粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)氣味結(jié)合蛋白(odorant binding protein,OBP)基因BtabOBP2和BtabOBP4的cDNA全長。BtabOBP2(Gen Bank登錄號:AIS71883)和BtabOBP4(Gen Bank登錄號:AIS71884)的cDNA序列全長分別為1107 bp和874 bp,完整開放閱讀框(ORF)分別為744 bp和429 bp,分別編碼247和142氨基酸,BtabOBP4有6個保守的半胱氨酸,屬于典型OBP,而BtabOBP2除了具有典型OBP的6個半胱氨酸,增加了3個保守的半胱氨酸,屬于Plus-C OBP。將得到的BtabOBP2和BtabOBP4重組到原核表達載體pET30a(+),轉(zhuǎn)化入BL21(DE3)大腸桿菌感受態(tài)細胞,用IPTG誘導融合蛋白表達。采用親和層析和凝膠過濾層析純化融合蛋白,并進行Western blot分析。結(jié)果顯示,BtabOBP2和BtabOBP4融合蛋白在大腸桿菌中均有可溶性表達,Western blot結(jié)果證實所表達的融合蛋白確實為目的蛋白。BtabOBP2融合蛋白在SDS-PAGE中的表觀分子量比預測的分子量大了6.53 k Da,用重組腸激酶切掉6×His標簽后,目的蛋白的表觀分子量與預測分子量相近,偏差降低,說明6×His標簽是造成融合蛋白表觀分子量偏差的原因。本研究明確了煙粉虱氣味結(jié)合蛋白基因BtabOBP2和BtabOBP4的核苷酸、氨基酸序列特征,并成功進行了原核表達和純化,為進一步研究這兩個OBP基因的分子結(jié)構(gòu)和功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Cloning of Bemisia tabaci (Gennadius) odor binding protein (odorant binding protein, from whitefly by RT-PCR and RACE techniques OBP) BtabOBP2 and BtabOBP4. BtabOBP2 (Gen Bank accession number: AIS71883) and BtabOBP4 (Gen Bank accession number: AIS71884) cDNA sequence is 1107 bp and 874 bp, complete open reading frame (ORF) is 744 bp and 429 bp, respectively. Encoding 247 and 142 amino acids, respectively, BtabOBP4 has six conserved cysteines, which belong to typical OBP, while BtabOBP2 adds three conserved cysteines to Plus-C OBP. in addition to the six cysteine of typical OBP. The obtained BtabOBP2 and BtabOBP4 were recombined into the prokaryotic expression vector pET30a (), and transformed into BL21 (DE3) Escherichia coli competent cells. IPTG was used to induce the expression of the fusion protein. The fusion protein was purified by affinity chromatography and gel filtration chromatography and analyzed by Western blot. The results showed that both BtabOBP2 and BtabOBP4 fusion proteins were soluble expressed in E. coli. The Western blot results confirmed that the expressed fusion protein was the target protein. The apparent molecular weight of the BtabOBP2 fusion protein in SDS-PAGE was 6.53k Da, higher than the predicted molecular weight, and the 6 脳 His label was removed by recombinant enterokinase. The apparent molecular weight of the target protein was similar to that of the predicted molecular weight, and the deviation was decreased, which indicated that the 6 脳 His tag was the cause of the apparent molecular weight deviation of the fusion protein. In this study, the nucleotide and amino acid sequence characteristics of BtabOBP2 and BtabOBP4 genes of Bemisia Tabaci odor binding protein were confirmed, and the prokaryotic expression and purification were successfully carried out, which laid a foundation for further study on the molecular structure and function of these two OBP genes.
【作者單位】： 山東省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所農(nóng)業(yè)部廢棄物基質(zhì)化利用重點實驗室山東省農(nóng)業(yè)面源污染防控重點實驗室;山東省農(nóng)業(yè)科學院生物技術(shù)研究中心;
【基金】：山東省農(nóng)業(yè)科學院青年科研基金(2015YQN36);山東省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新工程(CXGC2017A01) 山東省博士后創(chuàng)新項目專項資金(201203025) 山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系食用菌創(chuàng)新團隊建設(shè)項目(SDAIT-07-01)
【分類號】：S433.39

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本文編號：2373014