【摘要】：采用RT-PCR和RACE技術(shù)成功克隆煙粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)氣味結(jié)合蛋白(odorant binding protein,OBP)基因BtabOBP2和BtabOBP4的cDNA全長。BtabOBP2(Gen Bank登錄號:AIS71883)和BtabOBP4(Gen Bank登錄號:AIS71884)的cDNA序列全長分別為1107 bp和874 bp,完整開放閱讀框(ORF)分別為744 bp和429 bp,分別編碼247和142氨基酸,BtabOBP4有6個保守的半胱氨酸,屬于典型OBP,而BtabOBP2除了具有典型OBP的6個半胱氨酸,增加了3個保守的半胱氨酸,屬于Plus-C OBP。將得到的BtabOBP2和BtabOBP4重組到原核表達載體pET30a(+),轉(zhuǎn)化入BL21(DE3)大腸桿菌感受態(tài)細胞,用IPTG誘導(dǎo)融合蛋白表達。采用親和層析和凝膠過濾層析純化融合蛋白,并進行Western blot分析。結(jié)果顯示,BtabOBP2和BtabOBP4融合蛋白在大腸桿菌中均有可溶性表達,Western blot結(jié)果證實所表達的融合蛋白確實為目的蛋白。BtabOBP2融合蛋白在SDS-PAGE中的表觀分子量比預(yù)測的分子量大了6.53 k Da,用重組腸激酶切掉6×His標簽后,目的蛋白的表觀分子量與預(yù)測分子量相近,偏差降低,說明6×His標簽是造成融合蛋白表觀分子量偏差的原因。本研究明確了煙粉虱氣味結(jié)合蛋白基因BtabOBP2和BtabOBP4的核苷酸、氨基酸序列特征,并成功進行了原核表達和純化,為進一步研究這兩個OBP基因的分子結(jié)構(gòu)和功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Cloning of Bemisia tabaci (Gennadius) odor binding protein (odorant binding protein, from whitefly by RT-PCR and RACE techniques OBP) BtabOBP2 and BtabOBP4. BtabOBP2 (Gen Bank accession number: AIS71883) and BtabOBP4 (Gen Bank accession number: AIS71884) cDNA sequence is 1107 bp and 874 bp, complete open reading frame (ORF) is 744 bp and 429 bp, respectively. Encoding 247 and 142 amino acids, respectively, BtabOBP4 has six conserved cysteines, which belong to typical OBP, while BtabOBP2 adds three conserved cysteines to Plus-C OBP. in addition to the six cysteine of typical OBP. The obtained BtabOBP2 and BtabOBP4 were recombined into the prokaryotic expression vector pET30a (), and transformed into BL21 (DE3) Escherichia coli competent cells. IPTG was used to induce the expression of the fusion protein. The fusion protein was purified by affinity chromatography and gel filtration chromatography and analyzed by Western blot. The results showed that both BtabOBP2 and BtabOBP4 fusion proteins were soluble expressed in E. coli. The Western blot results confirmed that the expressed fusion protein was the target protein. The apparent molecular weight of the BtabOBP2 fusion protein in SDS-PAGE was 6.53k Da, higher than the predicted molecular weight, and the 6 脳 His label was removed by recombinant enterokinase. The apparent molecular weight of the target protein was similar to that of the predicted molecular weight, and the deviation was decreased, which indicated that the 6 脳 His tag was the cause of the apparent molecular weight deviation of the fusion protein. In this study, the nucleotide and amino acid sequence characteristics of BtabOBP2 and BtabOBP4 genes of Bemisia Tabaci odor binding protein were confirmed, and the prokaryotic expression and purification were successfully carried out, which laid a foundation for further study on the molecular structure and function of these two OBP genes.
【作者單位】： 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所農(nóng)業(yè)部廢棄物基質(zhì)化利用重點實驗室山東省農(nóng)業(yè)面源污染防控重點實驗室;山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究中心;
【基金】：山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院青年科研基金(2015YQN36);山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新工程(CXGC2017A01) 山東省博士后創(chuàng)新項目專項資金(201203025) 山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系食用菌創(chuàng)新團隊建設(shè)項目(SDAIT-07-01)
【分類號】：S433.39

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 朱家穎;楊璞;吳國星;和秋菊;尹立紅;熊忠平;;麗蠅蛹集金小蜂氣味結(jié)合蛋白基因的克隆與序列分析[J];環(huán)境昆蟲學(xué)報;2010年04期

2 吳少英,王桂榮,吳孔明,郭予元,原國輝,郭線茹;煙青蟲氣味結(jié)合蛋白基因的克隆與序列分析[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2005年09期

3 孫浩;趙雷修;周凡蕊;高慧;;紫色卷蛾氣味結(jié)合蛋白的同源模建[J];農(nóng)業(yè)災(zāi)害研究;2013年04期

4 鐘濤;尹姣;劉懷;王進軍;李克斌;韋永貴;曹雅忠;;草地螟觸角普通氣味結(jié)合蛋白基因的克隆及序列分析[J];植物保護;2008年04期

5 劉剛;;棉鈴蟲煙青蟲分散產(chǎn)卵習(xí)性與氣味結(jié)合蛋白有關(guān)[J];農(nóng)藥市場信息;2012年11期

6 徐紅星;陳東旭;張雅林;王敦;;小菜蛾普通氣味結(jié)合蛋白2基因的原核表達與多克隆抗體制備[J];環(huán)境昆蟲學(xué)報;2010年02期

7 魏丹;葉占峰;高建清;董雙林;;二化螟Minus-C氣味結(jié)合蛋白的分子克隆及功能鑒定[J];昆蟲學(xué)報;2013年07期

8 王桂榮,吳孔明,郭予元;棉鈴蟲觸角普通氣味結(jié)合蛋白1基因cDNA的部分克隆和定性分析(英文)[J];Entomologia Sinica;2001年04期

9 陸崢;張妍妍;洪芳;蔣國芳;;東亞飛蝗氣味結(jié)合蛋白Ⅰ的生物信息學(xué)分析[J];南京師大學(xué)報(自然科學(xué)版);2010年02期

10 谷少華;孫洋;任麗燕;張雪瑩;張永軍;吳孔明;郭予元;;苜蓿盲蝽氣味結(jié)合蛋白AlinOBP3的克隆、表達及結(jié)合特性分析[J];科學(xué)通報;2010年Z2期

相關(guān)會議論文 前6條

1 范佳;Sophie Vandermoten;Frederic Francis;劉勇;陳巨蓮;程登發(fā);;特異結(jié)合EβF的氣味結(jié)合蛋白在蚜蟲及其天敵等6種昆蟲中的表達[A];植�？萍紕�(chuàng)新與病蟲防控專業(yè)化——中國植物保護學(xué)會2011年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2011年

2 范蔭蔭;李為爭;原國輝;;昆蟲嗅覺分子機理的研究進展[A];華中昆蟲研究（第八卷）[C];2012年

3 王滿V，

本文編號：2373014