發(fā)布時間：2018-12-06 07:29

【摘要】：為探討南方水稻黑條矮縮病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)的種群變異并獲得S7-1原核表達蛋白,采用RT-PCR技術(shù)擴增SRBSDV安徽分離物S7片段,并進行克隆、測序及序列分析,再利用特異性引物擴增該分離物S7-1基因并克隆到原核表達載體p ET-GST上,重組質(zhì)粒p ET-S7-1轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)及Ni~(2+)-NTA親和柱純化融合蛋白,再進行Western blot檢測。結(jié)果顯示,SRBSDV安徽分離物S7片段與其它SRBSDV各個分離物S7片段的序列相似性極高,達99.3%~99.9%,而與斐濟病毒屬Fijivirus其它種之間的序列相似性較低,為35.5%~73.3%。SRBSDV安徽分離物與其它SRBSDV各個分離物聚成1個單獨的分支,彼此間親緣關(guān)系較近。試驗獲得了分子質(zhì)量約為68 k D的S7-1融合蛋白,且GST單抗能夠與S7-1融合蛋白發(fā)生特異性反應(yīng),表明本研究得到的融合蛋白確為靶標蛋白。
[Abstract]:In order to study the population variation of southern rice black stripe dwarf virus (Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV) and obtain the prokaryotic expression protein S7-1, the S7 fragment of SRBSDV Anhui isolate was amplified by RT-PCR technique, and cloned, sequenced and sequenced. The S7-1 gene was amplified by specific primers and cloned into prokaryotic expression vector p ET-GST. The recombinant plasmid p ET-S7-1 was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3), IPTG induced) and purified by Ni~ (2) -NTA affinity column. Western blot test was performed. The results showed that the sequence similarity between S7 fragment of Anhui isolate of SRBSDV and that of other SRBSDV isolates was very high, up to 99.39.The sequence similarity between S7 fragment of Anhui isolate and other species of Fijian virus Fijivirus was lower than that of other species of Fijian virus. 35.5%~73.3%.SRBSDV Anhui isolate and other SRBSDV isolates were clustered into a single branch, and the relationship between them was close. The S7-1 fusion protein with molecular weight of about 68kD was obtained, and the GST monoclonal antibody could react specifically with S7-1 fusion protein, which indicates that the fusion protein obtained in this study is a target protein.
【作者單位】： 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31371915,31671999) 安徽省教育廳自然科學(xué)基金(KJ2012A113)
【分類號】：S435.11

【參考文獻】

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【共引文獻】

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本文編號：2365661