【摘要】：為了探索天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)在斑節(jié)對蝦(Penaeus monodon)氨氮(NH3-N)解毒代謝中的作用,該研究利用RACE技術(shù)獲得了斑節(jié)對蝦AST基因(PmAST)的cDNA全長序列,進(jìn)行了相關(guān)生物信息學(xué)分析,在此基礎(chǔ)上采用熒光定量與氨氮脅迫實(shí)驗(yàn)的方法研究了PmAST基因在斑節(jié)對蝦的不同組織以及不同濃度氨氮脅迫過程中差異表達(dá)情況。該序列全長1 957 bp,開放閱讀框(ORF)為1 242 bp,3'非編碼區(qū)(UTR)為584 bp,包括含有30個堿基的poly(A)尾,5'非編碼區(qū)(UTR)為131 bp。ORF可編碼413個氨基酸,預(yù)測分子量為45.852 kD,理論等電點(diǎn)為8.85。序列含有1個AAT-like超家族結(jié)構(gòu)域、15個磷酸化位點(diǎn)和2個糖基化位點(diǎn)。PmAST的mRNA在斑節(jié)對蝦各組織中都有表達(dá),在肝胰腺中表達(dá)量最高,其次為鰓組織,在胃和腦組織中的表達(dá)量最低。96 h氨氮脅迫后熒光定量PCR分析結(jié)果表明,PmAST在肝胰腺和鰓組織中都具有不同程度的表達(dá)上調(diào),顯著高于對照組(P0.05)。研究結(jié)果表明斑節(jié)對蝦的PmAST基因在氨氮脅迫條件下會出現(xiàn)表達(dá)上調(diào),并且氨氮濃度越高其上調(diào)幅度也越大,所以PmAST參與了斑節(jié)對蝦的急性氨氮脅迫應(yīng)答。
[Abstract]:In order to explore the role of aspartate aminotransferase (AST) in the detoxification and metabolism of (Penaeus monodon) ammonia nitrogen (NH3-N) in Penaeus vannamei, the cDNA full-length sequence of AST gene (PmAST) was obtained by RACE technique. Based on the analysis of bioinformatics, the differential expression of PmAST gene in different tissues of Penaeus Monodon (Penaeus Monodon) and different concentrations of ammonia nitrogen stress was studied by fluorescence quantitative and ammonia-nitrogen stress methods. The total length of 1 957 bp, open reading frame (ORF) is 1 242 bp,3' non-coding region, (UTR) is 584 bp, including poly (A) tail containing 30 bases, (UTR) of 5 'noncoding region 131bp.ORF can encode 413 amino acids. The predicted molecular weight is 45.852 kD, and the theoretical isoelectric point is 8.85. The sequence contained a AAT-like superfamily domain, 15 phosphorylation sites and 2 glycosylation sites. MRNA of PmAST was expressed in all tissues of Penaeus vannamei, the highest in hepatopancreas, followed by Gill tissue. The results of fluorescence quantitative PCR analysis showed that the expression of PmAST in hepatopancreas and Gill tissues was up-regulated in varying degrees, which was significantly higher than that in the control group (P0.05). The results showed that the expression of PmAST gene in Penaeus Monodon was up-regulated under ammonia-nitrogen stress, and the higher the concentration of NH3-N was, the larger the up-regulation was. So PmAST was involved in the acute ammonia-nitrogen stress response of Penaeus Monodon.
【作者單位】： 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院南海水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部南海漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院;
【基金】：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)(蝦)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金(CARS-47) 廣東省省級科技計(jì)劃項(xiàng)目(2014B020202003) 廣東省海洋與漁業(yè)科技推廣專項(xiàng)(A201501A06) 海南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(313117) 深圳市生物產(chǎn)業(yè)發(fā)展專項(xiàng)資金現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生物產(chǎn)業(yè)推廣扶持計(jì)劃項(xiàng)目(NYSW20140331010053)
【分類號】：S917.4

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