【摘要】：目的克隆分離藥用真菌豬苓菌核的主要協(xié)助轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族基因并進(jìn)行生物信息學(xué)分析。方法采用RT-PCR技術(shù)從中國(guó)野生豬苓菌核(Polyporus umbellatus)中克隆得到9個(gè)主要協(xié)助轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族(major facilitator superfamily,MFS)基因,利用生物信息學(xué)方法分析這9個(gè)基因的特點(diǎn),并利用qPCR驗(yàn)證這9個(gè)基因在不同豬苓菌核部分的表達(dá)情況。結(jié)果該9個(gè)基因cDNA包含的完整開(kāi)放閱讀框在1 321~1 860 bp之間,編碼的氨基酸的數(shù)量在441~620之間,相對(duì)分子質(zhì)量在(48.45~64.79)×10~3之間,理論等電點(diǎn)在6.59~9.56之間。氨基酸序列分析表明,這9個(gè)基因編碼的主要協(xié)助轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的跨膜區(qū)在11~14之間。氨基酸序列多重比對(duì)及系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)結(jié)果顯示,Comp34750、Comp34832、Comp29252、Comp42895、Comp32579和Comp27555與MFS general substrate transporter同源性比較高,Comp28872和Comp26306與MFS單糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(MFS monosaccharide transporter)同源性比較高,Comp33117與MFS糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(MFS sugar transporter)同源性比較高。實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR分析表明,這9個(gè)基因在不同的菌核部分都有表達(dá),除基因Comp34382和Comp32579在共生部位顯著下調(diào)外,其他7個(gè)基因都是表達(dá)顯著上調(diào)。結(jié)論提示這些基因可能以不同方式參與了豬苓的防御反應(yīng)及吸收外界營(yíng)養(yǎng)元素的過(guò)程。
[Abstract]:Objective to clone and isolate the major helper transporter superfamily genes of medicinal fungus Polyporus umbellata sclerotia and analyze their bioinformatics. Methods RT-PCR technique was used to clone 9 major helper transporter superfamily (major facilitator superfamily,MFS) genes from Chinese wild Polyporus umbellata sclerotia (Polyporus umbellatus). The characteristics of the 9 genes were analyzed by bioinformatics. The expression of the nine genes in different Sclerotinia umbellata was verified by qPCR. Results the complete open reading frame contained by the 9 genes cDNA was between 1 321 and 1 860 bp, the number of amino acids encoded was between 441t620, the relative molecular weight was (48.45 ~ 64.79) 脳 10 ~ (-3), and the theoretical isoelectric point was between 6.59 and 9.56. The amino acid sequence analysis showed that the transmembrane region of the major helper transporter of these 9 genes was between 11 and 14. The results of multiple amino acid sequence alignment and phylogenetic tree showed that Comp34750,Comp34832,Comp29252,Comp42895,Comp32579 and Comp27555 had high homology with MFS general substrate transporter, and Comp28872 and Comp26306 had high homology with MFS monosaccharide transporter (MFS monosaccharide transporter). Comp33117 and MFS sugar transporter (MFS sugar transporter) have high homology. Real-time fluorescence quantitative RT-PCR analysis showed that all the 9 genes were expressed in different sclerotia. Except for the down-regulation of Comp34382 and Comp32579 in symbiotic site, the other 7 genes were up-regulated. Conclusion these genes may be involved in the defense response of Polyporus umbellata and the absorption of external nutrients in different ways.
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;江蘇理工學(xué)院電氣信息工程學(xué)院生物信息與醫(yī)藥工程研究所;
【基金】：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃資助項(xiàng)目(2014CB13830X) 2014年度山西省煤基重點(diǎn)科技攻關(guān)項(xiàng)目資助項(xiàng)目(FT2014-03) 河北山區(qū)特色中藥材種質(zhì)資源評(píng)價(jià)與仿野生栽培技術(shù)研究與示范資助項(xiàng)目(16232503D)
【分類號(hào)】：S567.3

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