【摘要】：為鑒定貓皰疹病毒Ⅰ型(FHV-1)US3基因的編碼產(chǎn)物,本研究以提取FHV-1感染細(xì)胞的總RNA為模板,通過RT-PCR方法擴(kuò)增US3基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,測序結(jié)果顯示除了全長US3基因(1 056 bp)外,還出現(xiàn)了一個(gè)825 bp的片段(US3-X1)。該片段是由全長US3基因在226 bp~458 bp位置發(fā)生了自我剪接,導(dǎo)致234 bp DNA缺失而產(chǎn)生,但ORF并沒有改變。此外,通過重疊延伸PCR將US3基因226 bp處堿基"A"突變?yōu)?G"(m US3),改變自我剪接位點(diǎn)。將全長US3基因、m US3和US3-X1基因分別克隆至p3×Flag-CMV-10中,轉(zhuǎn)染F81細(xì)胞,經(jīng)western blot檢測表明FHV-1 US3可以表達(dá)兩種不同分子量的異構(gòu)蛋白,大小約為45 ku和50 ku。這種US3基因的剪接異構(gòu)體現(xiàn)象在豬偽狂犬病毒和人單純皰疹病毒中已有報(bào)道,而FHV-1 US3基因的剪接異構(gòu)體的鑒定尚屬首次。該研究結(jié)果為進(jìn)一步研究FHV-1 US3異構(gòu)體蛋白的功能奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to identify the encoding product of US3 gene of cat herpesvirus type I (FHV-1), the total RNA of FHV-1 infected cells was used as template, and the transcription product of US3 gene was amplified by RT-PCR. In addition to the full-length US3 gene (1 056 bp), a 825 bp fragment (US3-X1) was found. The fragment was generated by self-splicing of the full-length US3 gene at 226 bp~458 bp, resulting in the deletion of 234 bp DNA, but the ORF did not change. In addition, the nucleotide "A" at 226 bp of US3 gene was mutated to "G" (m US3) by overlapping extension of PCR, and the self-splicing site was changed. The full-length US3 gene, m US3 gene and US3-X1 gene were cloned into p3 脳 Flag-CMV-10 and transfected into F81 cell line respectively. Western blot analysis showed that FHV-1 US3 could express two kinds of isomerism proteins with different molecular weight, about 45 ku and 50 ku.. The splicing isomer of US3 gene has been reported in porcine pseudorabies virus and human herpes simplex virus, but the identification of splicing isomer of FHV-1 US3 gene is the first time. The results laid a foundation for further study on the function of FHV-1 US3 isomer proteins.
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院;中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所/獸醫(yī)生物技術(shù)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然基金青年基金(31402201)
【分類號】：S852.65

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 王峰;黃璐圓;;人錳超氧化物歧化酶基因剪接異構(gòu)體的表達(dá)分析[J];生物技術(shù)通報(bào);2010年03期

2 ;[J];;年期

相關(guān)會議論文 前7條

1 任偉;陸超;張永梅;周國平;;兩種新的干擾素調(diào)節(jié)因子-3剪接異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)及表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會第五次全國兒科中青年學(xué)術(shù)交流大會論文匯編（上冊）[C];2008年

2 柴祥;何濤;倪海波;殷文江;李亨;高殿帥;;GDNF剪接異構(gòu)體在小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)的研究[A];中國解剖學(xué)會2013年年會論文文摘匯編[C];2013年

3 金蕊;周國平;袁文霄;徐華國;任偉;莊麗麗;;哮喘相關(guān)基因ORMDL3新剪接異構(gòu)體的克隆鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2011（第十二次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議）論文匯編[C];2011年

4 富顯果;張朵;張曉;柯龍鳳;嚴(yán)愛貞;朱忠勇;蘭風(fēng)華;;脆性X智力障礙1基因新型可變剪接外顯子和剪接異構(gòu)體的鑒定[A];第八次全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會議(中華醫(yī)學(xué)會2009年醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)年會)論文摘要匯編[C];2009年

5 劉永;胡成鈺;;草魚ADAR1剪接異構(gòu)體基因的鑒定與組織表達(dá)分析[A];中國水產(chǎn)學(xué)會魚病專業(yè)委員會2013年學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2013年

6 劉玉松;劉肖萍;張志遠(yuǎn);范旭;趙琳;張鳳華;徐紅運(yùn);段二珍;盧曉艷;夏平安;崔保安;;豬IgGIIB類Fc受體剪接異構(gòu)體的分子特征[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物傳染病學(xué)分會第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

7 李軍華;余章龍;昌鳴先;;草魚PGRP6剪接異構(gòu)體的克隆與表達(dá)模式分析[A];中國水產(chǎn)學(xué)會魚病專業(yè)委員會2013年學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2013年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 任偉;干擾素調(diào)節(jié)因子3第二內(nèi)含子內(nèi)剪接異構(gòu)體1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

2 覃艷紅;L型PML-RARα融合基因不同剪接異構(gòu)體對維甲酸誘導(dǎo)分化的影響及與剪接因子hnRNPA1、ASF/SF2的相關(guān)性研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前5條

1 羅超;TCF4N剪接異構(gòu)體在食管癌細(xì)胞中的表達(dá)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2015年

2 楊揚(yáng);基于信息通道模型的轉(zhuǎn)錄組重建與分析關(guān)鍵技術(shù)研究[D];清華大學(xué);2015年

3 王怡;干擾素調(diào)節(jié)因子3第二內(nèi)含子中新剪接異構(gòu)體2核心啟動子的功能特征[D];南京醫(yī)科大學(xué);2011年

4 袁文霄;人ORMDL3基因第一內(nèi)含子內(nèi)剪接異構(gòu)體啟動子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

5 劉玉松;豬IgGⅡB類Fc受體剪接異構(gòu)體克隆與活性鑒定[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

，

本文編號：2355008