【摘要】：為獲得具有良好免疫原性的綿羊肺炎支原體(MO)重組蛋白,利用ABCpred等軟件預(yù)測(cè)分析MO EF-P、PDHA、P97相似蛋白和EF-Ts蛋白的優(yōu)勢(shì)線性抗原表位,構(gòu)建多表位融合基因MO-meAg1,合成后將其亞克隆至表達(dá)載體pET-32a(+),構(gòu)建原核表達(dá)載體pET-32a(+)-MO-meAg1。將pET-32a(+)-MOmeAg1轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞E.coli BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后檢測(cè)重組蛋白反應(yīng)原性和免疫原性。SDSPAGE結(jié)果顯示,MO-meAg1重組蛋白分子質(zhì)量約34.5ku;Western blot分析結(jié)果顯示,該重組蛋白可被MO陽(yáng)性血清特異性識(shí)別,具有良好的反應(yīng)原性。小鼠免疫試驗(yàn)結(jié)果表明,重組蛋白MO-meAg1具有較強(qiáng)的免疫原性,誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的抗血清其間接血凝效價(jià)可達(dá)1∶128以上。獲得的多表位融合蛋白MO-meAg1為綿羊支原體肺炎的免疫學(xué)診斷及新型疫苗研究奠定基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to obtain (MO) recombinant protein of Mycoplasma pneumoniae of sheep with good immunogenicity, the dominant linear epitopes of MO EF-P,PDHA,P97 similar protein and EF-Ts protein were predicted and analyzed by ABCpred and other software. Construction of multiple epitope fusion gene MO-meAg1, synthesis and subcloning into expression vector pET-32a (), to construct prokaryotic expression vector pET-32a ()-MO-meAg1. PET-32a ()-MOmeAg1 was transformed into E.coli BL21 (DE3), IPTG induced expression). The results of SDSPAGE showed that the molecular weight of MO-meAg1 recombinant protein was about 34.5 ku. The results of Western blot analysis showed that the recombinant protein could be specifically recognized by MO positive serum and had good reactivity. The results of mouse immunological test showed that the recombinant protein MO-meAg1 had strong immunogenicity, and the indirect hemagglutination titer of the antiserum induced by the recombinant protein was over 1: 128. The obtained multiepitope fusion protein MO-meAg1 lays the foundation for the immunological diagnosis of Mycoplasma Sheep pneumonia and the study of novel vaccine.
【作者單位】： 石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所;
【基金】：國(guó)家國(guó)際科技合作專項(xiàng)(2014DFR31310) 國(guó)家自然科學(xué)基金(31360596,30960274)~~
【分類號(hào)】：S852.62

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本文編號(hào)：2345637