【摘要】：為獲得具有良好免疫原性的綿羊肺炎支原體(MO)重組蛋白,利用ABCpred等軟件預測分析MO EF-P、PDHA、P97相似蛋白和EF-Ts蛋白的優(yōu)勢線性抗原表位,構建多表位融合基因MO-meAg1,合成后將其亞克隆至表達載體pET-32a(+),構建原核表達載體pET-32a(+)-MO-meAg1。將pET-32a(+)-MOmeAg1轉化至感受態(tài)細胞E.coli BL21(DE3),IPTG誘導表達后檢測重組蛋白反應原性和免疫原性。SDSPAGE結果顯示,MO-meAg1重組蛋白分子質量約34.5ku;Western blot分析結果顯示,該重組蛋白可被MO陽性血清特異性識別,具有良好的反應原性。小鼠免疫試驗結果表明,重組蛋白MO-meAg1具有較強的免疫原性,誘導機體產生的抗血清其間接血凝效價可達1∶128以上。獲得的多表位融合蛋白MO-meAg1為綿羊支原體肺炎的免疫學診斷及新型疫苗研究奠定基礎。
[Abstract]:In order to obtain (MO) recombinant protein of Mycoplasma pneumoniae of sheep with good immunogenicity, the dominant linear epitopes of MO EF-P,PDHA,P97 similar protein and EF-Ts protein were predicted and analyzed by ABCpred and other software. Construction of multiple epitope fusion gene MO-meAg1, synthesis and subcloning into expression vector pET-32a (), to construct prokaryotic expression vector pET-32a ()-MO-meAg1. PET-32a ()-MOmeAg1 was transformed into E.coli BL21 (DE3), IPTG induced expression). The results of SDSPAGE showed that the molecular weight of MO-meAg1 recombinant protein was about 34.5 ku. The results of Western blot analysis showed that the recombinant protein could be specifically recognized by MO positive serum and had good reactivity. The results of mouse immunological test showed that the recombinant protein MO-meAg1 had strong immunogenicity, and the indirect hemagglutination titer of the antiserum induced by the recombinant protein was over 1: 128. The obtained multiepitope fusion protein MO-meAg1 lays the foundation for the immunological diagnosis of Mycoplasma Sheep pneumonia and the study of novel vaccine.
【作者單位】： 石河子大學動物科技學院;中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所;
【基金】：國家國際科技合作專項(2014DFR31310) 國家自然科學基金(31360596,30960274)~~
【分類號】：S852.62

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本文編號：2345637