【摘要】：本試驗(yàn)為了克隆廣西巴馬小型豬甲狀腺激素受體β1(TRβ1)基因編碼序列并構(gòu)建該基因的真核表達(dá)載體,取廣西巴馬小型豬肝臟組織作為材料,采用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出TRβ1基因編碼序列,與pMD19-T-Simple載體連接,測序正確的重組質(zhì)粒雙酶切后,連接pEGFP-N1載體,構(gòu)建pEGFP-N1-TRβ1真核表達(dá)載體。經(jīng)雙酶切和測序鑒定后,重組質(zhì)粒pEGFP-N1-TRβ1轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,培養(yǎng)48 h后,在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞熒光蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果表明,本試驗(yàn)成功克隆了廣西巴馬小型豬的TRβ1基因cDNA序列,序列長度為1 368 bp,編碼455個(gè)氨基酸,與參考序列的同源性為99.6%,有5處位點(diǎn)突變,且全為同義突變。陽性重組質(zhì)粒pEGFP-N1-TRβ1轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞48 h后,在熒光顯微鏡下觀測出綠色熒光表達(dá)。
[Abstract]:In order to clone the encoding sequence of thyroid hormone receptor 尾 1 (TR 尾 1) gene from Guangxi Bama miniature pig and construct its eukaryotic expression vector, the liver tissue of Guangxi Bama miniature pig was used as the material. The coding sequence of TR 尾 1 gene was amplified by RT-PCR technique and ligated with pMD19-T-Simple vector. The recombinant plasmid was digested by double enzyme and ligated with pEGFP-N1 vector to construct pEGFP-N1-TR 尾 1 eukaryotic expression vector. After double enzyme digestion and sequencing, the recombinant plasmid pEGFP-N1-TR 尾 1 was transfected into 293T cells. After 48 h culture, the expression of fluorescent protein was observed under fluorescence microscope. The results showed that the TR 尾 1 gene cDNA sequence of Guangxi Bama mini-pig was cloned successfully. The length of the sequence was 1 368 bp, encoding 455 amino acids, and the homology was 99.6 with reference sequence. There were 5 locus mutations and all of them were synonymous mutations. The positive recombinant plasmid pEGFP-N1-TR 尾 1 was transfected into 293T cells for 48 h, and the green fluorescent expression was observed under fluorescence microscope.
【作者單位】： 廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物遺傳育種實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)體系廣西生豬創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)(nycytxgxcxtd-03-15) 廣西科技基礎(chǔ)條件平臺(tái)建設(shè)項(xiàng)目(15-235-04)共同資助
【分類號(hào)】：Q78;R73

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王愛德;覃燦;藍(lán)干球;;廣西巴馬小型豬解剖結(jié)構(gòu)初探[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);1991年03期

2 莫毅;郭亞芬;梁方方;蘭干球;蔣和生;李柏;;廣西巴馬小型豬卵泡抑素的克隆及原核表達(dá)[J];中國畜牧獸醫(yī);2007年10期

3 孫雷;路毅;莊新杰;曾有權(quán);張明;陸陽清;盧晟盛;盧克煥;;廣西巴馬小型豬1號(hào)染色體DNA文庫的構(gòu)建和鑒定[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2009年11期

4 歐陽康;吳健敏;陳鳳蓮;馬玲;劉文娟;白安斌;郭亞芬;;廣西巴馬小型豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄B亞型病毒5′非編碼區(qū)的序列擴(kuò)增及分析[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年01期

5 王愛德，蘭干球，郭亞芬;巴馬小型豬的選育[J];中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)雜志;1995年03期

6 王愛德,郭亞芬,李柏,胡傳活,魏泓;巴馬小型豬血液生化指標(biāo)[J];上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2001年01期

7 王獻(xiàn)偉;盧晟盛;盧克煥;;廣西巴馬小型豬成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的建立[J];西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2011年05期

8 盧晟盛;羅龍興;郭亞芬;蘭干球;王愛德;;廣西巴馬小型豬不同年齡生殖激素水平的分析[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2007年06期

9 盧晟盛;羅龍興;蘭宗寶;黎宗強(qiáng);郭亞芬;蘭干球;王愛德;;廣西巴馬小型豬雄性初情期和精液性狀的分析[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2007年06期

10 楊秀榮;蘭干球;郭亞芬;王愛德;;廣西巴馬小型豬生長激素(pGH)基因全序列克隆及序列分析[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué);2007年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 歐陽康;鄧世杰;吳健敏;陳鳳蓮;張啟模;郭亞芬;;不同代次廣西巴馬小型豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒3′UTR克隆及結(jié)構(gòu)和調(diào)控元件分析[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會(huì)論文集(下冊)[C];2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 許崇利;肝特異性表達(dá)hNPC1L1轉(zhuǎn)基因巴馬小型豬的構(gòu)建[D];吉林大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前6條

1 羅琴;廣西巴馬小型豬生長素和脂聯(lián)素基因的克隆及多態(tài)性分析[D];廣西大學(xué);2008年

2 黃雄軍;廣西巴馬小型豬活化素β_A、β_B亞基基因成熟肽序列的克隆及原核表達(dá)[D];廣西大學(xué);2007年

3 潘漢世;廣西巴馬小型豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒的檢測及分子生物學(xué)特性的研究[D];廣西大學(xué);2007年

4 鐘雅婷;廣西巴馬小型豬PERV全基因擴(kuò)增與分析及cDNA克隆的構(gòu)建[D];廣西大學(xué);2014年

5 王世凱;廣西巴馬小型豬Myostatin和Leptin基因的克隆、表達(dá)及動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)[D];廣西大學(xué);2008年

6 周希萌;小型豬γ干擾素基因的克隆及原核表達(dá)[D];西南大學(xué);2006年

，

本文編號(hào)：2326354