【摘要】：本試驗為了克隆廣西巴馬小型豬甲狀腺激素受體β1(TRβ1)基因編碼序列并構(gòu)建該基因的真核表達(dá)載體,取廣西巴馬小型豬肝臟組織作為材料,采用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出TRβ1基因編碼序列,與pMD19-T-Simple載體連接,測序正確的重組質(zhì)粒雙酶切后,連接pEGFP-N1載體,構(gòu)建pEGFP-N1-TRβ1真核表達(dá)載體。經(jīng)雙酶切和測序鑒定后,重組質(zhì)粒pEGFP-N1-TRβ1轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,培養(yǎng)48 h后,在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞熒光蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果表明,本試驗成功克隆了廣西巴馬小型豬的TRβ1基因cDNA序列,序列長度為1 368 bp,編碼455個氨基酸,與參考序列的同源性為99.6%,有5處位點突變,且全為同義突變。陽性重組質(zhì)粒pEGFP-N1-TRβ1轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞48 h后,在熒光顯微鏡下觀測出綠色熒光表達(dá)。
[Abstract]:In order to clone the encoding sequence of thyroid hormone receptor 尾 1 (TR 尾 1) gene from Guangxi Bama miniature pig and construct its eukaryotic expression vector, the liver tissue of Guangxi Bama miniature pig was used as the material. The coding sequence of TR 尾 1 gene was amplified by RT-PCR technique and ligated with pMD19-T-Simple vector. The recombinant plasmid was digested by double enzyme and ligated with pEGFP-N1 vector to construct pEGFP-N1-TR 尾 1 eukaryotic expression vector. After double enzyme digestion and sequencing, the recombinant plasmid pEGFP-N1-TR 尾 1 was transfected into 293T cells. After 48 h culture, the expression of fluorescent protein was observed under fluorescence microscope. The results showed that the TR 尾 1 gene cDNA sequence of Guangxi Bama mini-pig was cloned successfully. The length of the sequence was 1 368 bp, encoding 455 amino acids, and the homology was 99.6 with reference sequence. There were 5 locus mutations and all of them were synonymous mutations. The positive recombinant plasmid pEGFP-N1-TR 尾 1 was transfected into 293T cells for 48 h, and the green fluorescent expression was observed under fluorescence microscope.
【作者單位】： 廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院動物遺傳育種實驗室;
【基金】：國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)體系廣西生豬創(chuàng)新團(tuán)隊(nycytxgxcxtd-03-15) 廣西科技基礎(chǔ)條件平臺建設(shè)項目(15-235-04)共同資助
【分類號】：Q78;R73

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本文編號：2326354