【摘要】：本研究通過(guò)RACE技術(shù)在半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)中克隆得到1個(gè)CD40同源基因。該基因c DNA全長(zhǎng)為2098 bp,開(kāi)放閱讀框?yàn)?011 bp,可編碼由336個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)。推導(dǎo)得到的CD40氨基酸序列包含1個(gè)信號(hào)肽、1個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)區(qū)、2個(gè)N-糖基化位點(diǎn)以及含4個(gè)富含半胱氨酸的保守結(jié)構(gòu)區(qū)。不同物種氨基酸序列同源分析結(jié)果顯示,該基因與哺乳類、兩棲類以及硬骨魚類相似性為28%~47%,其中與硬骨魚類相似性較高。系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果顯示,半滑舌鰨CD40與其他硬骨魚類CD40聚類為一支,哺乳類與兩棲類CD40聚類為另一支。熒光定量PCR結(jié)果顯示,CD40在健康半滑舌鰨不同組織中均有表達(dá),其中在鰓、肝和脾等組織中表達(dá)量較高,在腸、肌肉和皮膚中表達(dá)量較低,在腦和腎中微量表達(dá)。經(jīng)哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)感染刺激后,與PBS處理的對(duì)照組相比,該基因m RNA在半滑舌鰨3個(gè)主要免疫組織(肝、脾和腎)中表達(dá)量均呈顯著性升高,在肝中12 h到達(dá)峰值,在脾和腎中6 h達(dá)到峰值。上述結(jié)果表明CD40基因參與了半滑舌鰨抵抗哈維氏弧菌的免疫應(yīng)答反應(yīng)。
[Abstract]:In this study, a CD40 homologous gene was cloned from (Cynoglossus semilaevis) of Cynoglossus semilaevis by RACE technique. The full length of c DNA is 2098 bp, open reading frame and 1011 bp, can encode a 336 amino acid protein. The deduced amino acid sequence of CD40 consists of a signal peptide, a transmembrane domain, two N-glycosylation sites and four conserved domains rich in cysteine. The results of amino acid sequence homology analysis of different species showed that the similarity between the gene and mammals amphibians and bony fishes was 2847 and the similarity between this gene and bony fish was high. Phylogenetic analysis showed that CD40 and other bony fish CD40 were clustered into one branch, and mammalian and amphibian CD40 cluster was another branch. The results of fluorescence quantitative PCR showed that CD40 was expressed in different tissues of healthy tongue sole, including Gill, liver and spleen, lower in intestine, muscle and skin, and slightly expressed in brain and kidney. Compared with the control group treated with PBS, the expression of m RNA was significantly increased in three major immune tissues (liver, spleen and kidney) of Cynoglossus semilaevis, and reached its peak at 12 h after (Vibrio harveyi) infection by Vibrio Harvey. The peak value was reached in spleen and kidney at 6 h. These results suggest that CD40 gene is involved in the immune response of Cynoglossus semilaevis against Vibrio Harvey.
【作者單位】： 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部海洋與漁業(yè)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院;青島海洋科學(xué)與技術(shù)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過(guò)程功能實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(31530078) 山東省泰山學(xué)者攀登計(jì)劃專項(xiàng)資助項(xiàng)目
【分類號(hào)】：S917.4

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