【摘要】：小麥?zhǔn)俏覈闹饕Z食作物。小麥紋枯病是由禾谷絲核菌(Rhizoctonia cerealis)引起的小麥重要土傳病害。凍害是影響小麥生長最主要的自然災(zāi)害之一。生產(chǎn)上,抗紋枯病、兼抗紋枯病與凍害小麥品種較為匱乏,因此分離克隆抗紋枯、耐凍害相關(guān)基因,研究其功能,為抗紋枯病及凍害育種提供理論基礎(chǔ),具有重要意義。本研究通過構(gòu)建表達載體p20-Rssp2897:6MYC-TaCAD12、pAHC25-MYC-TaPK-R1,用基因槍轉(zhuǎn)化法獲得轉(zhuǎn)TaCAD12、TaPK-R1基因小麥。獲得以下研究結(jié)果：轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥的研究結(jié)果：(1)對轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥To-T2代進行PCR以及qRT-PCR分析,獲得5個轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥株系。(2)用Western blot分析5個轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥株系中的陽性植株,結(jié)果表明這5個轉(zhuǎn)基小麥株系中c-MYC-TaCAD12融合蛋白均被表達。(3)用WK207、R0301分別對轉(zhuǎn)TaCAD12基因小麥T1、T2代進行接種,于收獲期進行紋枯病鑒定,結(jié)果表明,在轉(zhuǎn)基因小麥中過量表達TaCAD12基因,能提高對不同來源及致病力禾谷絲核菌的抗性。轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥的研究結(jié)果：(1)對轉(zhuǎn)TaPK-Rl基因小麥To-T4代進行PCR、 RT-PCR以及qRT-PCR分析,獲得3個轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥株系。(2)利用Western blot分析3個轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥株系中的陽性植株,結(jié)果表明這3個轉(zhuǎn)基因小麥株系中c-MYC-TaPK-R1融合蛋白均被表達。(3)對T4代轉(zhuǎn)基因小麥及受體進行低溫處理,統(tǒng)計存活率、測定脯氨酸和電解質(zhì)滲漏率含量,結(jié)果表明,過量表達TaPK-R1基因提高了轉(zhuǎn)基因小麥對寒冷環(huán)境的適應(yīng)性。(4)用R0301對轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥T1、T2代進行接種及紋枯病鑒定,用WK207對轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥T3、T4代進行接種及紋枯病鑒定,抗紋枯病鑒定結(jié)果表明,在轉(zhuǎn)基因小麥中過表達TaPK-R1基因,能在不同程度上提高小麥對不同菌株禾谷絲核菌的抗性。(5)經(jīng)過分子檢測與接種抗病鑒定、低溫脅迫處理,創(chuàng)制、選育出兼抗紋枯病與凍害的轉(zhuǎn)TaPK-R1基因小麥新種質(zhì)3份。
[Abstract]:Wheat is the main food crop in China. Wheat sheath blight is an important soil-borne disease of wheat caused by Rhizoctonia graminearum (Rhizoctonia cerealis). Freezing injury is one of the most important natural disasters affecting wheat growth. In the production of wheat varieties resistant to sheath blight and freezing injury, it is of great significance to isolate and clone the genes related to resistance to grain blight and freeze injury, to study its function, and to provide a theoretical basis for breeding for resistance to sheath blight and freezing injury. In this study, the expression vector p20-Rssp2897: 6MYC-TaCAD12 (pAHC25-MYC-TaPK-R1) was constructed, and the transgenic wheat was obtained by gene gun transformation. The following results were obtained: (1) PCR and qRT-PCR analysis were carried out on the To-T2 generation of TaCAD12 transgenic wheat, and 5 TaCAD12 transgenic wheat lines were obtained. (2) Western blot was used to analyze the positive plants in 5 TaCAD12 transgenic wheat lines. The results showed that the c-MYC-TaCAD12 fusion protein was expressed in all of the five transgenic wheat lines. (3) WK207,R0301 was used to inoculate the T _ 1 / T _ 2 generation of the transgenic wheat with TaCAD12 gene and identify the sheath blight at the harvest stage. The results showed that the TaCAD12 gene was overexpressed in the transgenic wheat. It can improve the resistance to Rhizoctonia graminearum from different sources and pathogenicity. The results were as follows: (1) three TaPK-R1 transgenic wheat lines were obtained by PCR, RT-PCR and qRT-PCR analysis on the To-T4 generation of TaPK-Rl transgenic wheat. (2) Western blot was used to analyze the positive plants in three TaPK-R1 transgenic wheat lines. The results showed that the c-MYC-TaPK-R1 fusion protein was expressed in all three transgenic wheat lines. (3) the low temperature treatment of T4 generation transgenic wheat and its receptor were used to calculate the survival rate and the content of proline and electrolyte leakage. Overexpression of TaPK-R1 gene improved the adaptability of transgenic wheat to cold environment. (4) inoculation and identification of sheath blight in T _ 1 and T _ 2 generation of transgenic wheat with TaPK-R1 gene were carried out with R0301, and inoculation and identification of sheath blight in T _ 3 and T _ 4 generation of transgenic wheat with TaPK-R1 gene with WK207. The results of identification of resistance to sheath blight showed that overexpression of TaPK-R1 gene in transgenic wheat could improve the resistance of wheat to different strains of Rhizoctonia graminearum to varying degrees. (5) the resistance to Rhizoctonia graminearum was identified by molecular detection and inoculation. Three new wheat germplasms with TaPK-R1 gene were selected, which were resistant to sheath blight and freezing injury.
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S512.1

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9 ;美國正抓緊時間推廣轉(zhuǎn)基因小麥[J];北京農(nóng)業(yè);2009年32期

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6 潘潔 羅崢曦;阿根廷試水轉(zhuǎn)基因小麥[N];糧油市場報;2013年

7 關(guān)鍵 記者 王穎;我省兩項科研課題的研究達到國際先進水平[N];黑龍江經(jīng)濟報;2007年

8 本報駐加拿大記者　 杜華斌;換個角度切入缺水農(nóng)業(yè)[N];科技日報;2006年

9 通訊員 嚴(yán)玉聽;印度種子公司謀化開發(fā)轉(zhuǎn)基因小麥和水稻[N];農(nóng)資導(dǎo)報;2010年

10 李博;澳試種轉(zhuǎn)基因小麥和大麥[N];農(nóng)資導(dǎo)報;2014年

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2 段曉亮;三種植物凝集素基因在轉(zhuǎn)基因小麥中的表達及其抗蚜效果分析[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

3 李志崗;轉(zhuǎn)基因小麥抗穗發(fā)芽特性的分子鑒定、遺傳分析與抗性機理研究[D];山西農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

4 王軍衛(wèi);外源脫水應(yīng)答轉(zhuǎn)錄因子DREB1B和CBF1基因在轉(zhuǎn)基因小麥中表達研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2005年

5 劉太國;BYDV-GPV株系正向串聯(lián)體結(jié)構(gòu)復(fù)制酶基因介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因小麥研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2003年

6 吳茂森;大麥黃矮病毒GPV株系復(fù)制酶基因介導(dǎo)的抗病毒轉(zhuǎn)基因小麥的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2000年

7 燕飛;hpRNA和pac1基因介導(dǎo)抗大麥黃矮病毒轉(zhuǎn)基因小麥研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

8 吳蓓蕾;小麥矮縮病毒分子群體遺傳結(jié)構(gòu)與RNAi介導(dǎo)的抗BYDV-GAV轉(zhuǎn)基因小麥研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2007年

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10 樊秀花;轉(zhuǎn)基因小麥外源基因品質(zhì)基因表達的遺傳研究[D];華中科技大學(xué);2005年

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本文編號：2273962