發(fā)布時(shí)間：2018-10-11 18:39

【摘要】：基于轉(zhuǎn)化病毒基因介導(dǎo)抗性,通過(guò)在植物表達(dá)載體p CAMBIA 2301上插入啟動(dòng)子 內(nèi)含子 終止子的方式,構(gòu)建一種含有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的、通用型強(qiáng)的RNAi載體骨架結(jié)構(gòu);以柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)的p25、p20和p23基因保守序列為模板設(shè)計(jì)正向片段和反向片段,先后與骨架載體連接,成功構(gòu)建了3個(gè)RNAi載體(分別命名為ds2301 p25、ds2301 p20和ds2301 p23),并將載體ds2301 p23注射入墨西哥萊蒙葉片。制作p23基因的地高辛標(biāo)記探針,用Northern雜交檢測(cè)是否有si RNA產(chǎn)生。結(jié)果表明:用Northern雜交可以檢測(cè)到p23特異的si RNA,在墨西哥萊蒙葉片中瞬時(shí)表達(dá)的農(nóng)桿菌ds2301 p23可以發(fā)生RNAi,表達(dá)有效的si RNA。本研究中構(gòu)建的骨架載體可以廣泛用于RNAi載體的構(gòu)建,含有柑橘衰退病毒基因片段的3個(gè)載體可以用于基因功能分析及具有CTV抗性的柑橘種質(zhì)資源獲得。
[Abstract]:Based on the transformation virus gene mediated resistance, a universal RNAi vector skeleton structure with hairpin structure was constructed by inserting the promoter intron terminator into the plant expression vector p CAMBIA 2301. Using the conserved sequence of p25p20 and p23 genes of Citrus recession virus (citrus tristeza virus,CTV) as template, forward and reverse fragments were designed and connected with skeleton vector successively. Three RNAi vectors (ds2301 p25ds2301 p20 and ds2301 p23) were successfully constructed, and the vector ds2301 p23 was injected into the leaves of Lemont, Mexico. A digoxigenin labeled probe of p23 gene was made and si RNA production was detected by Northern hybridization. The results showed that the transient expression of p23 specific si RNA, in the leaf of Agrobacterium tumefaciens ds2301 p23 in Lemmon, Mexico, could be detected by Northern hybridization. The RNAi, expression of p23 could be found in the leaves of Agrobacterium tumefaciens. The framework vector constructed in this study can be widely used in the construction of RNAi vector, and three vectors containing the gene fragment of Citrus recession virus can be used to analyze the gene function and obtain citrus germplasm resources with CTV resistance.
【作者單位】： 湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝園林學(xué)院;國(guó)家柑橘改良中心長(zhǎng)沙分中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基因項(xiàng)目(300900972,3157211) 公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(xiàng)(201203076 06) 湖南省研究生科研創(chuàng)新項(xiàng)目(CX2013B290)
【分類號(hào)】：Q943.2;S436.66

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