發(fā)布時(shí)間：2018-10-09 18:31

【摘要】：豬鏈球菌(Streptococcus suis,SS)是一種對(duì)養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)危害嚴(yán)重的重要細(xì)菌性病原,在全球范圍內(nèi)都造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。豬鏈球菌病的主要發(fā)病表現(xiàn)有腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、肺炎和急性敗血癥死亡等。它同時(shí)也是一種重要的人畜共患病病原,中國(guó)在1998年及2005年都曾出現(xiàn)嚴(yán)重的人感染豬鏈球菌事件。根據(jù)其莢膜多糖抗原的不同,豬鏈球菌至少可分為29個(gè)血清型,其中豬鏈球菌2型(Streptococcussuis seretype2,SS2)流行性最廣,致病力最強(qiáng)。對(duì)豬鏈球菌2型毒力相關(guān)的研究,可為進(jìn)一步了解豬鏈球菌病的致病機(jī)制以及防控該類(lèi)疫病提供理論依據(jù)。本試驗(yàn)對(duì)本實(shí)驗(yàn)室自1998年來(lái)分離保存的357株豬鏈球菌菌株,通過(guò)豬鏈球菌2型的血清型特異性PCR檢測(cè)體系與豬鏈球菌2型血清凝集試驗(yàn),從中篩選出101株血清型2型菌株。綜合文獻(xiàn)選取了豬鏈球菌2型的22種毒力因子基因(包括mrp,epf,sly,fbps,rgg,ofs,srtA,pgdA,gapdh,iga,endoD,ciaRH,salKR,manN,purD,rgg,dppⅣ,neuB,dltA,comR和permease)作為毒力基因差異性分布分析的靶基因,分別設(shè)計(jì)了這22種毒力基因的檢測(cè)引物,檢測(cè)了以上22種毒力基因在101株豬鏈球菌2型的分布,并且根據(jù)得到的毒力因子譜進(jìn)行了聚類(lèi)分析。毒力因子聚類(lèi)分析結(jié)果表明,101株豬鏈球菌2型菌株可被分為兩個(gè)毒力群,即A群(14株)與B群(87株)。統(tǒng)計(jì)分析表明epf,sly,rgg,endoD,comR和permease在B群中的分布率要顯著高于A群。根據(jù)毒力基因差異性分布的結(jié)果,我們推測(cè)B群可能比A群有更強(qiáng)的毒力。為驗(yàn)證以上假設(shè),我們從A群和B群中隨機(jī)選出了部分菌株(挑選比率為A群3/14,B群7/87),分別以斑馬魚(yú)和BALB/c小鼠為動(dòng)物模型評(píng)估其毒力水平。在斑馬魚(yú)動(dòng)物模型上,所挑選菌株的攻毒劑量為1.0 × 107,1.0 × 106和1.0 × 105 CFU/尾,以腹腔注射的方式進(jìn)行攻毒。攻毒結(jié)果表明B群菌株在三個(gè)攻毒梯度上都顯示出了比A群菌株更高的毒力水平,而且在1.0 × 105CFU/尾的梯度上毒力差異尤為顯著。BALB/c小鼠動(dòng)物模型各菌株的攻毒劑量為1.0 × 109,2.0 × 108和4.0 × 107 CFU/只,以腹腔注射的方式進(jìn)行攻毒。除菌株JX081202外,另外6株B群菌株均在BALB/c小鼠攻毒模型上被鑒定為強(qiáng)毒,而3株A群菌株則被鑒定為弱毒。以上斑馬魚(yú)與BALB/c小鼠動(dòng)物攻毒試驗(yàn)的結(jié)果均證實(shí)了我們的推測(cè),即B群具有比A群有更強(qiáng)的毒力。毒力基因epf,sly,rgg,endoD,comR和permease在A群與B群中分布存在顯著差異,由于comR在A菌株中是突變體,另外5個(gè)基因具有成為毒力標(biāo)志基因的潛力。同時(shí)我們也注意到,毒力基因srtA,gdh,pgdA,gapdh,iga,ciaRH,manN,purD,dppⅣ,ofs,fbps,SspA,neuB以及dltA在A群和B群中均有較高分布。針對(duì)以上14種毒力基因,我們?cè)O(shè)計(jì)了 qRT-PCR引物,并對(duì)其轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示neuB,dltA,fbps和pgdA在B群菌株中的表達(dá)量要顯著高于A群菌株。因此,本研究進(jìn)一步證實(shí)了豬鏈球菌2型存在不同的毒力群,在不同的毒力群間部分毒力基因的分布和表達(dá)具差異性,在一定程度上解釋了強(qiáng)毒株與弱毒株毒力水平的差異,為豬鏈球菌的毒力研究提供了一個(gè)新的視角。更重要的是,我們提出的潛在的毒力標(biāo)志基因,在豬鏈球菌2型菌株的毒力鑒定中有應(yīng)用價(jià)值,可能會(huì)對(duì)豬鏈球菌病的預(yù)防控制有所幫助。
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【學(xué)位授予單位】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S852.611

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2260343