【摘要】：豬鏈球菌(Streptococcus suis,SS)是一種對養(yǎng)豬產業(yè)危害嚴重的重要細菌性病原,在全球范圍內都造成了重大的經濟損失。豬鏈球菌病的主要發(fā)病表現(xiàn)有腦膜炎、關節(jié)炎、心內膜炎、肺炎和急性敗血癥死亡等。它同時也是一種重要的人畜共患病病原,中國在1998年及2005年都曾出現(xiàn)嚴重的人感染豬鏈球菌事件。根據(jù)其莢膜多糖抗原的不同,豬鏈球菌至少可分為29個血清型,其中豬鏈球菌2型(Streptococcussuis seretype2,SS2)流行性最廣,致病力最強。對豬鏈球菌2型毒力相關的研究,可為進一步了解豬鏈球菌病的致病機制以及防控該類疫病提供理論依據(jù)。本試驗對本實驗室自1998年來分離保存的357株豬鏈球菌菌株,通過豬鏈球菌2型的血清型特異性PCR檢測體系與豬鏈球菌2型血清凝集試驗,從中篩選出101株血清型2型菌株。綜合文獻選取了豬鏈球菌2型的22種毒力因子基因(包括mrp,epf,sly,fbps,rgg,ofs,srtA,pgdA,gapdh,iga,endoD,ciaRH,salKR,manN,purD,rgg,dppⅣ,neuB,dltA,comR和permease)作為毒力基因差異性分布分析的靶基因,分別設計了這22種毒力基因的檢測引物,檢測了以上22種毒力基因在101株豬鏈球菌2型的分布,并且根據(jù)得到的毒力因子譜進行了聚類分析。毒力因子聚類分析結果表明,101株豬鏈球菌2型菌株可被分為兩個毒力群,即A群(14株)與B群(87株)。統(tǒng)計分析表明epf,sly,rgg,endoD,comR和permease在B群中的分布率要顯著高于A群。根據(jù)毒力基因差異性分布的結果,我們推測B群可能比A群有更強的毒力。為驗證以上假設,我們從A群和B群中隨機選出了部分菌株(挑選比率為A群3/14,B群7/87),分別以斑馬魚和BALB/c小鼠為動物模型評估其毒力水平。在斑馬魚動物模型上,所挑選菌株的攻毒劑量為1.0 × 107,1.0 × 106和1.0 × 105 CFU/尾,以腹腔注射的方式進行攻毒。攻毒結果表明B群菌株在三個攻毒梯度上都顯示出了比A群菌株更高的毒力水平,而且在1.0 × 105CFU/尾的梯度上毒力差異尤為顯著。BALB/c小鼠動物模型各菌株的攻毒劑量為1.0 × 109,2.0 × 108和4.0 × 107 CFU/只,以腹腔注射的方式進行攻毒。除菌株JX081202外,另外6株B群菌株均在BALB/c小鼠攻毒模型上被鑒定為強毒,而3株A群菌株則被鑒定為弱毒。以上斑馬魚與BALB/c小鼠動物攻毒試驗的結果均證實了我們的推測,即B群具有比A群有更強的毒力。毒力基因epf,sly,rgg,endoD,comR和permease在A群與B群中分布存在顯著差異,由于comR在A菌株中是突變體,另外5個基因具有成為毒力標志基因的潛力。同時我們也注意到,毒力基因srtA,gdh,pgdA,gapdh,iga,ciaRH,manN,purD,dppⅣ,ofs,fbps,SspA,neuB以及dltA在A群和B群中均有較高分布。針對以上14種毒力基因,我們設計了 qRT-PCR引物,并對其轉錄水平進行了檢測。結果顯示neuB,dltA,fbps和pgdA在B群菌株中的表達量要顯著高于A群菌株。因此,本研究進一步證實了豬鏈球菌2型存在不同的毒力群,在不同的毒力群間部分毒力基因的分布和表達具差異性,在一定程度上解釋了強毒株與弱毒株毒力水平的差異,為豬鏈球菌的毒力研究提供了一個新的視角。更重要的是,我們提出的潛在的毒力標志基因,在豬鏈球菌2型菌株的毒力鑒定中有應用價值,可能會對豬鏈球菌病的預防控制有所幫助。
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【學位授予單位】：南京農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.611

【參考文獻】

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本文編號：2260343