【摘要】：目的探討核因子kappa B(nuclear factor kappa B,NF-κB)信號通路對多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)U266、RPMI8226細(xì)胞增殖和DNMT1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)基因表達(dá)的影響及相關(guān)機(jī)制。方法采用不同濃度NF-κB抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)0、25、50、100和200μmol/L處理U266、RPMI8226細(xì)胞,光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化;細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(cell counting kit-8,CCK-8)檢測U266、RPMI8226細(xì)胞的增殖活性;流式細(xì)胞術(shù)檢測U266、RPMI8226細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡率;Western blot檢測NF-κB(P65)、Bcl-2、Cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8的蛋白水平;qPCR及Western blot檢測PDTC處理前后DNMT1基因和蛋白的表達(dá);采用地西他濱(Decitabine,DAC)1μmol/L作用于U266、RPMI8226細(xì)胞,Western blot檢測其對DNMT1、NF-κB(P65)表達(dá)的影響。結(jié)果PDTC處理U266、RPMI8226細(xì)胞48 h后,NF-κB(P65)的蛋白水平被抑制;PDTC抑制U266、RPMI8226細(xì)胞增殖,作用呈濃度及時(shí)間依賴性;PDTC作用48 h后,與對照組比較,細(xì)胞凋亡率呈濃度依賴性增高(P0.05);Western blot結(jié)果顯示PDTC可通過抑制NF-κB下調(diào)Bcl-2的表達(dá),使CyclinD1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8蛋白水平增加;通過PDTC抑制NF-κB,使DNMT1的mRNA及蛋白水平均降低。DAC作用于U266、RPMI8226細(xì)胞48 h后,DNMT1、NF-κB(P65)的蛋白水平均降低。結(jié)論P(yáng)DTC抑制NF-κB信號通路,同時(shí)抑制MM U266、RPMI8226細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;PDTC誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制與下調(diào)抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá),激活凋亡途徑,使CyclinD1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8表達(dá)增加有關(guān);通過PDTC抑制NF-κB使DNMT1基因表達(dá)降低;DAC可抑制DNMT1、NF-κB蛋白水平;MM中NF-κB與DNMT1可能存在相互作用。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of nuclear factor kappa B (nuclear factor kappa BnNF- 魏 B signal pathway on the proliferation of multiple myeloma (multiple myeloma,MM) U266 RPMI8226 cells and the expression of DNMT1 (DNA methyltransferase 1 DNMT1 gene. Methods U266 RPMI8226 cells were treated with pyrrolidine dithiocarbamate (pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC) with different concentrations of NF- 魏 B inhibitor (pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC). The morphological changes of U266 RPMI8226 cells were observed under light microscope, and the proliferative activity of U266 RPMI8226 cells was detected by cell count kit (cell counting kit-8,CCK-8. The cell cycle and apoptosis rate of U266 RPMI8226 cells were detected by flow cytometry. The protein levels of NF- 魏 B (p65) Bcl-2Cyclin D _ 1cleaved caspase-3 and cleaved caspase-8 were detected by Western blot. The expression of DNMT1 gene and protein was detected by Western blot before and after PDTC treatment. The effect of Decitabine,DAC 1 渭 mol/L on the expression of DNMT1,NF- 魏 B (p65) in U266 RPMI8226 cells was detected by Western blot. Results after PDTC was treated with U266 RPMI8226 cells for 48 h, the protein level of NF- 魏 B (p65) was inhibited. PDTC inhibited the proliferation of U266 RPMI8226 cells in a concentration-and time-dependent manner. The apoptosis rate was increased in a concentration dependent manner (P0.05). The results of Western blot showed that PDTC could increase the expression of CyclinD1,cleaved caspase-3 and cleaved caspase-8 by inhibiting the expression of Bcl-2 by NF- 魏 B. After inhibiting NF- 魏 B by PDTC, both mRNA and protein levels of DNMT1 were decreased. The protein levels of NF- 魏 B (p65) in U266 RPMI8226 cells were decreased after 48 h. Conclusion PDTC inhibits the NF- 魏 B signaling pathway and inhibits the proliferation of MM U266 RPMI8226 cells. The mechanism of inducing apoptosis is related to the down-regulation of the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2, activation of apoptotic pathway, and increased expression of CyclinD1,cleaved caspase-3 and cleaved caspase-8. Inhibition of DNMT1 gene expression by PDTC could inhibit the level of DNMT1,NF- 魏 B protein and the interaction between NF- 魏 B and DNMT1 in MM.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R733.3

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本文編號：2248369