【摘要】：對解脂亞羅酵母中甲羥戊酸途徑的限速酶HMGR進(jìn)行了生物信息學(xué)分析,克隆其活性結(jié)構(gòu)域(tHMG,第441~875位氨基酸),并與標(biāo)記分子GFP共表達(dá)。生物信息學(xué)分析表明,HMGR基因可編碼一個含有999個氨基酸的疏水性不穩(wěn)定蛋白,該蛋白前500個氨基酸肽鏈含有較多的跨膜區(qū),其理論分子量和等電點(diǎn)分別為254.93kDa和4.77;活性結(jié)構(gòu)域包含506個氨基酸,理論分子量和等電點(diǎn)分別為127.74kDa和4.93,不含跨膜區(qū)。兩個蛋白的二級結(jié)構(gòu)主要為α-螺旋和無規(guī)則卷曲,三級結(jié)構(gòu)均以同源四聚體的狀態(tài)存在。在激發(fā)光(488nm)下觀察融合表達(dá)tHMGGFP的酵母細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生綠色熒光。經(jīng)測定解脂亞羅酵母超表達(dá)催化域(tHMG)后,酶比活為1.14U/mg,比對照組提高了62.7%,此結(jié)果說明HMGR催化域部分可以獨(dú)立表達(dá),提高細(xì)胞內(nèi)的HMGR酶活水平。
[Abstract]:The rate-limiting enzyme HMGR of mevalic acid pathway in Lipirolimus cerevisiae was analyzed by bioinformatics, and its active domain (tHMG, 441 ~ 875 amino acid) was cloned and co-expressed with the marker GFP. Bioinformatics analysis showed that the HMGR gene could encode a hydrophobic unstable protein containing 999 amino acids. The theoretical molecular weight and isoelectric point are 254.93kDa and 4.77, respectively. The active domain contains 506 amino acids, and the theoretical molecular weight and isoelectric point are 127.74kDa and 4.93, respectively. The secondary structures of the two proteins were mainly 偽 -helix and irregular crimp, and the tertiary structures existed in the state of homologous tetramer. The yeast cells fused with tHMGGFP were observed under excitation light (488nm) and found to produce green fluorescence. The specific activity of (tHMG) was 1.14 U / mg, which was 62.7% higher than that of the control group. The results showed that the catalytic domain of HMGR could be expressed independently and the activity of HMGR in cells could be increased.
【作者單位】： 陜西師范大學(xué)食品工程與營養(yǎng)科學(xué)學(xué)院;
【基金】：陜西省科技統(tǒng)籌項目(2015KTCQ02-07) 國家重點(diǎn)科技研發(fā)計劃(2017YFD0400700)
【分類號】：Q811.4;Q936

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