【摘要】：目的:大腸桿菌廣泛存在于自然界中,多數(shù)情況下以正常腸道菌群存在于人和動(dòng)物中。現(xiàn)今大腸桿菌作為畜禽對(duì)抗生素耐藥性的重要指示菌之一。沙門(mén)氏菌病是公共衛(wèi)生學(xué)上具有重要意義的人畜共患病之一,目前發(fā)現(xiàn)血清型多達(dá)兩千多種。動(dòng)物中,雞為沙門(mén)氏菌主要感染的源頭,嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致其死亡。金黃色葡萄球菌為自然界中分布最為廣泛的化膿性細(xì)菌之一,可導(dǎo)致人或動(dòng)物局部膿腫、敗血癥、膿毒血癥等。近十幾年來(lái),為了預(yù)防和治療細(xì)菌性疾病,促進(jìn)動(dòng)物的發(fā)育及生長(zhǎng),大量的抗菌藥物應(yīng)用于集約化養(yǎng)殖場(chǎng)或個(gè)體養(yǎng)殖戶(hù)中�？咕幬镩L(zhǎng)期、廣泛、不合理的使用,以及抗菌藥物的選擇壓力等原因促使大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌耐藥菌株不斷增加,耐藥譜不斷擴(kuò)大,甚至有些菌株對(duì)尚未用于臨床治療的新型抗菌藥物也表現(xiàn)出了耐藥性。氯霉素類(lèi)抗菌藥物是一類(lèi)廣譜類(lèi)抗生素,由于氯霉素毒性較強(qiáng),2002年我國(guó)把氯霉素列為獸用禁藥,氟苯尼考作為新一代氯霉素類(lèi)抗菌藥物被廣泛地使用于動(dòng)物細(xì)菌性疾病上。因此,對(duì)動(dòng)物源大腸桿菌、沙門(mén)氏菌以及金黃色葡萄球菌耐藥菌株、耐藥表型的流行情況以及氯霉素類(lèi)抗菌藥物耐藥基因的分布情況特征進(jìn)行研究,并分析相關(guān)性,對(duì)臨床獸醫(yī)及公共衛(wèi)生學(xué)有著積極的意義,為遏制大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌耐藥性的發(fā)展,指導(dǎo)獸醫(yī)臨床用藥上有重要意義,并為進(jìn)一步研究氯霉素類(lèi)抗菌藥物的耐藥機(jī)制奠定了一定的基礎(chǔ)。方法:本試驗(yàn)從2014年9月到2016年3月,在重慶市北碚區(qū)、合川區(qū)、榮昌區(qū)和墊江區(qū)等地的13個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)(戶(hù))分別采集大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌樣品,通過(guò)革蘭氏染色觀察形態(tài)學(xué)特征、PCR方法檢測(cè)鑒定分離大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌。采用紙片擴(kuò)散法,測(cè)定最終所分離鑒定的大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌對(duì)30種抗菌藥物的敏感性。再運(yùn)用PCR技術(shù),檢測(cè)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌的氯霉素類(lèi)抗菌藥物的耐藥基因:flor、clm A、fex A、fex B、cat、pex A和cfr7種基因。分析綜合所有菌株的耐藥表型與耐藥基因型之間的關(guān)系與符合率。結(jié)果:最終在重慶市北碚區(qū)、合川區(qū)、榮昌區(qū)和墊江縣等部分地區(qū)采集大腸桿菌樣品1003份,分離大腸桿菌695株,分離率為69.3%,其中雞源393株、豬源194株、牛源108株;沙門(mén)氏菌樣品867份,分離沙門(mén)氏菌66株,分離率為7.6%,其中雞源31株、豬源26株、牛源9株;金黃色葡萄球菌樣品926份,共分離103株,分離率為11.1%,其中雞源64株、豬源29株、牛源7株;共計(jì)菌株總數(shù)為864株。藥敏結(jié)果顯示,大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌對(duì)30種抗菌藥物均呈現(xiàn)不同程度的耐藥。其中大腸桿菌的平均耐藥率在6.2%~91.4%之間,大腸桿菌對(duì)青霉素G、氨芐西林等4種抗生素的耐藥率超過(guò)了70%;對(duì)氧氟沙星、阿米卡星耐藥率在20%以下。沙門(mén)氏菌的平均耐藥率在9.1%~100.0%之間,沙門(mén)氏菌對(duì)青霉素G、氨芐西林等5種抗生素的耐藥率均在85%以上;對(duì)氧氟沙星、頭孢他啶、阿米卡星的耐藥率在20%以下。金黃色葡萄球菌的平均耐藥率在12.6%~79.6%之間,金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素G、氨芐西林等4種抗生素的耐藥率在70%以上;對(duì)頭孢他啶、頭孢唑啉等8種抗生素的耐藥率不超過(guò)20%。大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌均呈現(xiàn)出不同程度的多重耐藥,大腸桿菌多重耐藥最高為29耐的菌株2株,最低為0耐的菌株1株;沙門(mén)氏菌多重耐藥最高為27耐的菌株1株,最低為4耐的菌株1株;金黃色葡萄球菌多重耐藥最高為25耐的菌株1株,最低為2耐的菌株有3株。從不同地區(qū)采集分離的大腸桿菌對(duì)30種抗菌藥物的的耐藥率來(lái)看,墊江縣分離菌株的耐藥率普遍高于北碚區(qū)、合川區(qū)和榮昌區(qū);沙門(mén)氏菌不同地區(qū)對(duì)不同抗菌藥物呈現(xiàn)不同程度的耐藥;金黃色葡萄球菌,北碚區(qū)分離菌株的耐藥率普遍低于合川區(qū)、榮昌區(qū)和墊江縣。不同動(dòng)物源大腸桿菌的耐藥率,其中雞源普遍高于豬源,豬源普遍高于牛源;不同動(dòng)物源沙門(mén)氏菌的耐藥率分布情況與大腸桿菌相似,雞源耐藥率最高,豬源次之,牛源耐藥率最低;不同動(dòng)物源金黃色葡萄球菌除對(duì)個(gè)別幾類(lèi)抗生素的牛源、兔源的耐藥率稍高以外,雞源的耐藥率普遍高于其他幾類(lèi)。從不同季節(jié)采集分離大腸桿菌的耐藥率得出,春季耐藥率高于夏季,秋季耐藥率高于夏季,冬季耐藥率再次稍微降低;沙門(mén)氏菌中,菌株對(duì)21種抗菌藥物的耐藥率高達(dá)100.0%,夏季、秋季、冬季間耐藥率沒(méi)有太大差異。不同季節(jié)分離的金黃色葡萄球菌四季間耐藥率的變化與大腸桿菌相似。耐藥基因電泳結(jié)果顯示,695株大腸桿菌中檢測(cè)出flor基因408株,檢出率為58.7%;clm A基因403株,檢出率為58.0%;cat基因257株,檢出率為37.0%;cfr基因6株,檢出率為0.9%。66株沙門(mén)氏菌中檢測(cè)出flor基因45株,檢出率為68.2%;clm A基因41株,檢出率為62.1%;cat基因52株,檢出率為78.8%;cfr基因2株,檢出率為3.0%。金黃色葡萄球菌中檢測(cè)出flor基因28株,檢出率為27.2%;clm A基因33株,檢出率為32.0%;cat基因45株,檢出率為43.7%;cfr基因1株,檢出率為1.0%;fex A基因43株,檢出率41.7%。本試驗(yàn)未檢測(cè)到fex B和pex A基因。大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌檢測(cè)出耐藥基因的菌株的耐藥表型與耐藥基因型符合率均超過(guò)50%,其中大腸桿符合的菌株數(shù)為356株,符合率為59.6%;沙門(mén)氏菌符合的菌株數(shù)為58株,符合率為93.5%;金黃色葡萄球菌的菌株數(shù)為51株,符合率為67.1%。大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌未檢測(cè)出耐藥基因的菌株的耐藥表型與耐藥基因型符合率,其中大腸桿菌符合的菌株數(shù)為68株,符合率為69.4%;沙門(mén)氏菌符合的菌株數(shù)為2株,符合率為50.0%;金黃色葡萄球菌符合的菌株數(shù)為9株,符合率為33.3%。結(jié)論:本試驗(yàn)菌株樣品采集時(shí)間為2014年9月至2016年3月,分別從重慶市北碚區(qū)北龍公司屠宰場(chǎng)、重慶市長(zhǎng)水禽業(yè)發(fā)展有限公司、重慶市合川區(qū)奶牛養(yǎng)殖戶(hù)陳兆強(qiáng)和重慶市榮昌區(qū)“重慶市種豬場(chǎng)”等13個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)采集大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌菌株樣品。大腸桿菌分離率為69.3%、沙門(mén)氏菌分離率為7.6%、金黃色葡萄球菌分離率為11.1%。大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌對(duì)30種抗菌藥物呈現(xiàn)不同程度的耐藥,大部分菌株存在多重耐藥的現(xiàn)象。且均對(duì)青霉素G、萬(wàn)古霉素等4種抗生素的耐藥程度最為嚴(yán)重,耐藥率較高,均超過(guò)70%;對(duì)阿米卡星耐藥率較低,低于20%。大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌對(duì)flor、clm A和cat基因的檢出率相對(duì)較高,其中clm A為攜帶菌株數(shù)最多的耐藥基因。未在本試驗(yàn)中檢測(cè)出fex B和pex A基因。大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌檢測(cè)出耐藥基因的菌株與其耐藥表型的符合率、以及未檢測(cè)出耐藥基因的菌株與其耐藥表型的符合率均未達(dá)到100.0%,
[Abstract]:OBJECTIVE: Escherichia coli (E.coli) is widely distributed in nature, and most of them are found in humans and animals. Today, E.coli is one of the important indicators of antibiotic resistance in livestock and poultry. S. aureus is one of the most widely distributed pyogenic bacteria in nature, which can cause local abscess, sepsis, sepsis and so on. In recent decades, in order to prevent and treat bacterial diseases, promote animal development and sepsis. A large number of antibiotics are used in intensive farms or individual farmers. The long-term, widespread, unreasonable use of antibiotics, as well as the pressure of antibiotic selection and other reasons for the increasing resistance of Escherichia coli, Salmonella and Staphylococcus aureus strains, drug resistance spectrum continues to expand, and even some strains have not yet been used. Chloramphenicol antibiotics are a kind of broad-spectrum antibiotics. Because of the strong toxicity of chloramphenicol, chloramphenicol was listed as a veterinary prohibited drug in 2002. Flufenicol, as a new generation of chloramphenicol antibiotics, is widely used in animal bacterial diseases. To study the epidemic situation of drug-resistant strains of Escherichia coli, Salmonella and Staphylococcus aureus, as well as the distribution characteristics of chloramphenicol-resistant genes, and to analyze the correlation, is of positive significance to clinical veterinary and public health, and to control E.coli, Salmonella and Staphylococcus aureus. The development of bacterial resistance is of great significance in guiding clinical veterinary drug use and laying a foundation for further study on the mechanism of chloramphenicol resistance. Methods: From September 2014 to March 2016, 13 farms (households) in Beibei District, Hechuan District, Rongchang District and Dijiang District of Chongqing City were selected to collect colic poles respectively. Samples of Escherichia coli, Salmonella and Staphylococcus aureus were identified by Gram staining and PCR. The susceptibility of 30 antibiotics to Escherichia coli, Salmonella and Staphylococcus aureus was determined by disk diffusion method. Resistance to chloramphenicol antibiotics in Escherichia coli, Salmonella and Staphylococcus aureus: flor, CLM A, Fex A, Fex B, cat, PEX A and CFR were detected by PCR. The relationship and coincidence rate between resistance phenotype and resistance genotype were analyzed and synthesized. A total of 1003 isolates of Escherichia coli and 695 isolates of Escherichia coli were isolated from Rongchang and Dianjiang counties. The isolation rate was 69.3%, of which 393 were chicken *, 194 from pig origin, 108 from cattle, 867 from Salmonella, 66 isolates from Salmonella, and 7.6% *, 31 of chicken origin, 26 from pig origin, 26 from bovine, and Staphylococcus aureus samples. A total of 103 isolates were isolated, with a separation rate of 11.1% * of which 64 strains were from chicken, 29 from pigs and 7 from cows. The total number of strains was 864. Drug sensitivity test showed that Escherichia coli, Salmonella and Staphylococcus aureus showed different degrees of resistance to 30 kinds of antibiotics. The average drug resistance rate of E. coli was between 6.2%~91.4% and E. coli to Penicillium. The resistance rates of Salmonella spp. to penicillin G, ampicillin and other antibiotics were between 9.1% and 100.0%. The resistance rates of Salmonella spp. to penicillin G, ampicillin and other five antibiotics were above 85%. The resistance rates to ofloxacin, ceftazidime and amikacin were below 20%. The average resistance rate of Staphylococcus aureus to penicillin G, ampicillin and other four antibiotics was more than 70%. The resistance rate of Staphylococcus aureus to ceftazidime, cefazolin and other eight antibiotics was less than 20%. Escherichia coli, Salmonella and Staphylococcus aureus showed different degrees of resistance. There were 2 strains with the highest 29-resistant E.coli and 1 strain with the lowest 0-resistant E.coli, 1 strain with the highest 27-resistant Salmonella and 1 strain with the lowest 4-resistant Salmonella, 1 strain with the highest 25-resistant Staphylococcus aureus and 3 strains with the lowest 2-resistant Staphylococcus aureus. The resistance rate of Enterobacter spp. to 30 kinds of antibiotics was generally higher in Dinjiang County than in Beibei, Hechuan and Rongchang districts; Salmonella showed different degrees of resistance to different antibiotics in different districts; Staphylococcus aureus and Beibei isolates were generally lower than in Hechuan, Rongchang and Dinjiang districts. The resistance rates of Escherichia coli from different animal sources were generally higher than that of pig * *, and the source of swine was generally higher than that of cattle. The distribution rate of Salmonella isolates from different animal sources was similar to E.coli * the highest resistance rate was found in chickens, followed by pigs, and lowest in cattle. The drug resistance rate of E. coli isolated from different seasons was higher in spring than in summer, higher in autumn than in summer, and slightly lower in winter. In autumn, there was no significant difference in the resistance rate in winter. The resistance rate of Staphylococcus aureus isolated in different seasons was similar to that of Escherichia coli. Among 66 strains of Salmonella spp., 45 strains of flor gene were detected, the detection rate was 68.2%; 41 strains of CLM A gene were detected, the detection rate was 62.1%; 52 strains of cat gene were detected, the detection rate was 78.8%; 2 strains of CFR gene were detected, the detection rate was 3.0%. 28 strains of flor gene were detected in Staphylococcus aureus, the detection rate was 27.2%; 33 strains of CLM A gene was detected, the detection rate was 32.0%; 45 strains of t gene, 43.7%; 1 strain of CFR gene, 1.0%; 43 strains of Fex A gene, 41.7%. The coincidence rate was 59.6% for 356 strains, 93.5% for Salmonella, and 67.1% for Staphylococcus aureus. Escherichia coli, Salmonella and Staphylococcus aureus did not detect resistant genes, and the coincidence rate between resistant phenotypes and resistant genotypes was 59.6%. The coincidence rate was 69.4%. Salmonella coincidence rate was 50.0%. Staphylococcus aureus coincidence rate was 33.3%. The isolation rate of Escherichia coli, Salmonella and Staphylococcus aureus was 69.3%, Salmonella was 7.6%, Staphylococcus aureus was 11.1%. Bacteria, Salmonella and Staphylococcus aureus were resistant to 30 kinds of antibiotics in varying degrees, and most of them were multidrug resistant. The resistance to penicillin G, vancomycin and other four kinds of antibiotics was the most serious, and the resistance rate was higher than 70%; the resistance rate to amikacin was lower than 20%. The detection rates of flor, CLM A and cat genes in S. aureus and S. aureus were relatively high, among which CLM A was the most resistant gene. The coincidence rates of resistant strains and their resistant phenotypes were not 100%.
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：S852.61

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2 肖茜文;農(nóng)產(chǎn)品加工中沙門(mén)氏菌和金黃色葡萄球菌多重PCR檢測(cè)試劑盒的研制[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2017年

3 陳潔;硬蜱卵蠟層抑菌分子研究[D];河北師范大學(xué);2015年

4 李霞;左旋咪唑增強(qiáng)金黃色葡萄球菌凝集因子A亞單位疫苗免疫效果的研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

5 陳文玲;適配體化磁納米富集及生物發(fā)光檢測(cè)金葡菌[D];江南大學(xué);2015年

6 劉有福;四種常見(jiàn)化膿性感染病原菌的分子檢測(cè)[D];昆明理工大學(xué);2015年

7 林作鵬;貝殼煅燒物抗菌性研究[D];大連海洋大學(xué);2014年

8 蘇怡;上海市醫(yī)院金黃色葡萄球菌抗生素耐藥及消毒劑抗性研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

9 閆虹;耐f裱蹺髁紙鴰粕咸亞蚓鴕┬約捌浞中脫芯縖D];鄭州大學(xué);2015年

10 劉靜;金黃色葡萄球菌分子特征及耐藥相關(guān)分子標(biāo)志[D];鄭州大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：2225904