【摘要】：該研究以含有GFP和GUS基因的質(zhì)粒和農(nóng)桿菌為載體,采用花粉管通道法對鐵皮石斛進(jìn)行轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究。結(jié)果表明:(1)鐵皮石斛種子萌發(fā)和原球莖生長對卡那霉素的最低致死濃度分別為90和150 mg·L~(-1)。進(jìn)一步研究證實(shí),在篩選轉(zhuǎn)化種子和原球莖時,可分別向培養(yǎng)基中添加100和150 mg·L~(-1)的卡那霉素進(jìn)行選擇培養(yǎng)。(2)以攜帶GFP和GUS基因的質(zhì)粒(pSuper1300和pBI121)和農(nóng)桿菌為載體,用無菌去離子水重懸質(zhì)粒pSuper1300和pBI121至濃度為100 ng·μL~(-1),用2%蔗糖+1/2MS+0.1%silwet-77+0.1%AS或5%蔗糖+0.1%silwet-77+0.1 mmol·L~(-1)AS重懸攜帶質(zhì)粒pSuper1300和pBI121的農(nóng)桿菌至菌液濃度為OD_(600)=0.7~0.8;在授粉后0.5~2.5 h內(nèi)使用柱頭滴加法導(dǎo)入攜帶外源基因的質(zhì)�；蜣r(nóng)桿菌溶液,收集成熟的轉(zhuǎn)化種子,經(jīng)選擇培養(yǎng)及PCR檢測發(fā)現(xiàn),幾乎所有處理的轉(zhuǎn)化材料均能檢測出外源GFP和GUS基因片段。另外,與農(nóng)桿菌相比,以質(zhì)粒為載體進(jìn)行轉(zhuǎn)化,可獲得更高的結(jié)實(shí)率。該研究結(jié)果為鐵皮石斛的基因工程育種提供了參考。
[Abstract]:In this study, the plasmid containing GFP and GUS genes and Agrobacterium tumefaciens were used as vectors to study the transgenic technology of Dendrobium candidum by pollen tube channel method. The results showed that: (1) the lowest lethal concentrations of kanamycin for seed germination and protocorm growth of Dendrobium candidum were 90 and 150 mg / L ~ (-1), respectively. Further studies confirmed that kanamycin containing 100 and 150 mg L ~ (-1) was added to the medium for selective culture when the transformed seeds and protocorms were screened. (2) plasmids carrying GFP and GUS genes (pSuper1300 and pBI121) and Agrobacterium tumefaciens were used as vectors. The concentration of Agrobacterium tumefaciens suspended with aseptic deionized water heavy suspension plasmids pSuper1300 and pBI121 was 100 ng 渭 L ~ (-1) with 2% sucrose 1/2MS 0.1%silwet-77 0.1%AS or 5% sucrose 0.1%silwet-77 0.1 mmol L ~ (-1) AS to carry plasmids pSuper1300 and pBI121. Introduction of a plasmid carrying a foreign gene or Agrobacterium tumefaciens solution, The mature transformed seeds were collected. After selective culture and PCR detection, it was found that almost all the transformed materials could detect exogenous GFP and GUS gene fragments. In addition, compared with Agrobacterium tumefaciens, plasmids were used as vectors to obtain higher seed setting rate. The results provide a reference for genetic engineering breeding of Dendrobium candidum.
【作者單位】： 廣西喀斯特植物保育與恢復(fù)生態(tài)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣西壯族自治區(qū)中國科學(xué)院廣西植物研究所;
【基金】：廣西科技重大專項(xiàng)(桂科重1355001-3-1,桂科重14124002-6,桂科重14124002-7) 廣西科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(桂科攻1346008-5) 廣西林業(yè)科技項(xiàng)目(桂林科字[2013]第15號)~~
【分類號】：Q943.2;S567.239

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本文編號：2203445