【摘要】：以馬乳酒樣乳桿菌ZW3基因組為模板,PCR擴(kuò)增得到乳糖酶中Lac L、Lac M兩個(gè)大小亞基片段,經(jīng)Eco RI和Sna BI雙酶切后,分別連接p PIC9K質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞DH5α,并驗(yàn)證其核苷酸序列正確。將重組質(zhì)粒p PIC9K-Lac L、p PIC9K-Lac M分別電轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115,構(gòu)建p PIC9K-Lac L-GS115重組子和p PIC9K-Lac M-GS115重組子,通過(guò)篩選得到抗G418濃度達(dá)到3.0 mg/m L,具有多拷貝基因的重組子。經(jīng)反轉(zhuǎn)錄PCR驗(yàn)證,c DNA上存在Lac L片段,并可檢測(cè)到乳糖酶酶活達(dá)到1.17 U/m L;p PIC9K-Lac M-GS115重組子誘導(dǎo)表達(dá)72 h后的發(fā)酵液上清經(jīng)SDS蛋白電泳檢測(cè)到目的條帶。
[Abstract]:Two large and small subunits of Lactobacillus lactobacillus were amplified from Lactobacillus cereus ZW3 genome by PCR. After being digested by Eco RI and Sna BI, the two subunits were ligated into p PIC9K plasmids, respectively. DH5 偽 was transformed into Escherichia coli competent cells and its nucleotide sequence was confirmed to be correct. The recombinant plasmid p PIC9K-Lac Ln p PIC9K-Lac M was electrotransformed into Pichia pastoris GS115, to construct p PIC9K-Lac L-GS115 recombinant and p PIC9K-Lac M-GS115 recombinant respectively. The recombinant plasmid with 3. 0 mg/m / L anti-G418 concentration was obtained. Reverse transcriptional PCR confirmed the existence of Lac L fragment on c DNA, and the supernatant of fermentation broth with lactase activity up to 1.17 UL / ml PIC9K-Lac M-GS115 for 72 h was detected by SDS protein electrophoresis.
【作者單位】： 天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31171629) 天津科技大學(xué)大學(xué)生實(shí)驗(yàn)室創(chuàng)新基金項(xiàng)目(1414A303)
【分類號(hào)】：Q78;Q55

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本文編號(hào)：2201432