天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

當(dāng)前位置:主頁 > 科技論文 > 基因論文 >

本氏煙草RNAi途徑基因的amiRNA載體構(gòu)建,瞬時表達(dá)及干擾效果分析

發(fā)布時間:2018-08-20 07:38
【摘要】:植物體內(nèi)有一系列基因抵抗病原侵染,以保證植物的正常生長。RNA干擾(RNAinterference,RNAi)是植物針對病毒侵染的一個重要的應(yīng)答反應(yīng)。人工微RNA(artificial microRNA,amiRNA)是一種高效沉默基因表達(dá)的第二代RNAi技術(shù),是利用天然miRNA的生成和作用原理設(shè)計的,以調(diào)控生物體內(nèi)某一個或多個基因的表達(dá)的一項新的基因沉默技術(shù)。病毒誘導(dǎo)的基因沉默(VIGS)也是沉默植物基因的有力手段。使用amiRNA的VIGS(MIR VIGS)是一種新開發(fā)的植物反向遺傳學(xué)研究技術(shù),其兼具amiRNA和VIGS技術(shù)的優(yōu)勢。本氏煙草(Nicotiana benthamiana)對超過500種不同的病毒敏感,廣泛應(yīng)用于植物與病原微生物相互作用以及高等植物基因功能的研究中,并且可以作為VIGS的良好宿主。植物的RNA沉默途徑中的幾乎所有的基因都已在擬南芥中發(fā)現(xiàn)和功能驗證。但是在本氏煙草中RNA沉默途徑相關(guān)基因的研究鮮有報道。本研究對本氏煙草中RNA沉默途徑相關(guān)的11條基因(AGO1a、AGO1b、AG02、DCL2、DCL3、DCL4、DRB4、HEN1、RDR1、RDR6、SGS3)進(jìn)行干擾研究。載體構(gòu)建成功后通過瞬時表達(dá)實驗分析,得到了如下結(jié)論:1)利用MIR VIGS技術(shù)在植物病毒載體pCVA中構(gòu)建了32個干擾載體,沉默了其中9條基因,沉默效率均在50%以上;2)利用amiRNA技術(shù)在植物雙元表達(dá)載體pBI121(Kpn Ⅰ)中構(gòu)建了 8個干擾載體,沉默了其中7條基因,沉默效率均在45%以上,其沉默效率整體上不如病毒載體pCVA的沉默效率高;3)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法侵染本氏煙草,病毒載體pCVA和病毒共侵染存在強(qiáng)烈的競爭關(guān)系,而植物雙元載體pBI121和病毒在侵染液濃度較低(如OD600=0.1)時共侵染則互不影響;4)利用植物雙元載體pBI121瞬時表達(dá),在侵染液濃度為OD600=0.1的條件下,NbAG02基因的下調(diào)使本氏煙草抗煙草花葉病毒(pJL24)的能力顯著減弱,而NbAGO1a、AGO1b、NbRDR1、NbDCL2基因的下調(diào)與煙草花葉病毒則沒有關(guān)系。
[Abstract]:RNA interference (RNAi) is an important plant response to viral infection. Artificial microRNA (amiRNA) is a second-generation RNAi technology that silences gene expression efficiently and utilizes natural microRNA production and production. Virus-induced gene silencing (VIGS) is also a powerful tool for silencing plant genes. VIGS using amiRNA (MIR VIGS) is a newly developed technique for plant reverse genetics, which combines amiRNA and VIGS techniques. Advantages. Nicotiana benthamiana is susceptible to more than 500 different viruses. It is widely used in the study of plant-pathogenic microorganism interactions and gene functions in higher plants. It can also serve as a good host for VIGS. Almost all genes in plant RNA silencing pathways have been found and functioned in Arabidopsis. Verification. However, few studies have been reported on RNA silencing pathway related genes in Ben's tobacco. In this study, 11 genes (AGO1a, AGO1b, AG02, DCL2, DCL3, DCL4, DRB4, HEN1, RDR1, RDR6, SGS3) related to RNA silencing pathway in Ben's tobacco were interfered with. After successful construction of the vector, the following conclusions were obtained: 1) 32 interfering vectors were constructed in plant virus vector pCVA by MIR VIGS technology, 9 of them were silenced, and the silencing efficiency was above 50%. 2) Eight interfering vectors were constructed in plant binary expression vector pBI121 (Kpn I) by amiRNA technology. Seven of them were silenced, and the silencing efficiency was above 45%. For example, the silencing efficiency of virus vector pCVA is high; 3) Agrobacterium tumefaciens-mediated infection of tobacco, virus vector pCVA and virus co-infection have a strong competitive relationship, while the co-infection of plant binary vector pBI121 and virus at low concentration (e.g. OD600 = 0.1) does not affect each other; 4) the use of plant binary vector pBI121 transient expression in the infection solution; Under the condition of OD600=0.1, the down-regulation of NbAG02 gene significantly weakened the resistance of tobacco to tobacco mosaic virus (pJL24), but the down-regulation of NbAGO1a, AGO1b, NbRDR1, NbDCL2 gene had no relationship with tobacco mosaic virus.
【學(xué)位授予單位】:內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2017
【分類號】:Q943.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)會議論文 前1條

1 魏綠;曹力強(qiáng);歐陽砥;席真;;利用交聯(lián)修飾的RNA以及帶有天然loop結(jié)構(gòu)的miRNA類似物探索RNAi途徑中的鏈選擇機(jī)制[A];中國化學(xué)會第28屆學(xué)術(shù)年會第3分會場摘要集[C];2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 張其猛;本氏煙草RNAi途徑基因的amiRNA載體構(gòu)建,,瞬時表達(dá)及干擾效果分析[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2017年



本文編號:2192900

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://sikaile.net/kejilunwen/jiyingongcheng/2192900.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶3ee1c***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要刪除請E-mail郵箱bigeng88@qq.com
欧洲一区二区三区蜜桃| 国产av一区二区三区麻豆| 日本一级特黄大片国产| 精品国产丝袜一区二区| 亚洲第一区二区三区女厕偷拍| 亚洲欧美日产综合在线网| 国产精品伦一区二区三区四季| 国产精品欧美在线观看| 午夜视频成人在线观看| 国产免费一区二区三区不卡| 激情视频在线视频在线视频| 日本av一区二区不卡| 日本人妻中出在线观看| 国产精品激情对白一区二区| 一区二区三区日韩经典| 不卡中文字幕在线免费看| 美女黄色三级深夜福利| 成人精品一区二区三区综合| 欧美一区二区在线日韩| 亚洲高清中文字幕一区二区三区| 黄色国产精品一区二区三区| 国产激情国产精品久久源| 午夜资源在线观看免费高清| 91欧美日韩精品在线| 国产偷拍盗摄一区二区| 日本淫片一区二区三区| 午夜免费精品视频在线看| 蜜桃传媒视频麻豆第一区| 免费人妻精品一区二区三区久久久| 国产成人精品一区二区三区| 91精品国产av一区二区| 蜜桃传媒在线正在播放| 成人免费高清在线一区二区| 91插插插外国一区二区婷婷| 久久99午夜福利视频| 99久久婷婷国产亚洲综合精品 | 日本av一区二区不卡| 国产亚洲欧美日韩国亚语| 亚洲欧美日本国产不卡| 日本美国三级黄色aa| 国产又粗又猛又长又黄视频|