【摘要】：目的探討局灶性腦缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)損傷時(shí),受損大腦皮質(zhì)中bcl-2同源結(jié)構(gòu)域蛋白(Beclin-1)、自噬相關(guān)基因7(autophagy related gene7,ATG7)、自噬相關(guān)基因3(autophagy related gene 3,ATG3)和自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3(microtubule-associated protein1 light chain3,LC3)的表達(dá)規(guī)律。方法將健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham組)和模型組(IR組)。其中模型組又分為再灌注IR 0h、1h、3h、6h、12h、24h六個(gè)亞組。采用大腦中動(dòng)脈栓塞術(shù)(middle cerebral artery occlusion,MCAO)制備局灶性腦缺血再灌注損傷模型。動(dòng)物蘇醒后采用神經(jīng)功能缺損評(píng)分,模型制備24 h后采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色及腦組織含水量方法鑒定模型是否成功。采用透射電鏡觀察各組大鼠大腦神經(jīng)元的自噬情況,采用免疫組化和免疫印跡方法檢測(cè)大腦皮質(zhì)Beclin-1、ATG7、ATG3和LC3的表達(dá)規(guī)律。結(jié)果模型鑒定結(jié)果顯示:sham組大鼠的行為學(xué)表現(xiàn)正常,神經(jīng)功能未見(jiàn)缺損癥狀,腦組織未見(jiàn)水腫和梗死區(qū);而IR各組大鼠均出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能缺損癥狀,IR 12h后腦組織含水量顯著增高,IR 6h后可見(jiàn)明顯的蒼白梗死區(qū),與sham組比較有顯著差異。透射電鏡sham組可見(jiàn)正常的神經(jīng)元形態(tài),而IR各組均可見(jiàn)到明顯的神經(jīng)元自噬。免疫組化染色后發(fā)現(xiàn),sham組僅見(jiàn)少量Beclin-1陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞,而IR不同時(shí)間點(diǎn)則呈現(xiàn)不同的表達(dá)增高趨勢(shì),其中IR 3h和IR 24h組呈現(xiàn)較明顯的表達(dá)。免疫印跡檢測(cè)Beclin-1也呈現(xiàn)一致的表達(dá)趨勢(shì)。免疫組化和免疫印跡結(jié)果顯示,ATG7、ATG3、LC3表達(dá)也呈現(xiàn)與Beclin-1一致的趨勢(shì)。結(jié)論Beclin-1、ATG7、ATG3、LC3在調(diào)節(jié)腦缺血再灌注損傷中的細(xì)胞自噬具有重要的作用。
[Abstract]:Objective to investigate the expression of bcl-2 homologous domain protein (Beclin-1), autophagy associated gene 7 (autophagy related gene7 ATG7, autophagy associated gene 3 (autophagy related gene 3, and microtubule-associated protein1 light chain3LC3 in the damaged cerebral cortex during focal cerebral ischemia-reperfusion (ischemia) injury. Methods healthy male SD rats were randomly divided into sham operation group (sham group) and model group (IR group). Among them, the model group was divided into six subgroups of IR 0 h, 1 h, 3 h, 6 h, 12 h and 24 h. Middle cerebral artery embolization (middle cerebral artery occlusion MCAO) was used to establish focal cerebral ischemia-reperfusion injury model. After recovery, neurological deficit score was used to evaluate the success of the model 24 hours later, and the TTC staining and the water content of brain tissue were used to determine the success of the model. The autophagy of cerebral neurons in each group was observed by transmission electron microscope, and the expression of ATG3 and LC3 in cerebral cortex were detected by immunohistochemistry and immunoblotting. Results the results of model identification showed that the behavior of rats in the control group was normal, the neurological function was not impaired, no edema and infarct area were found in the brain tissue. After 12 hours of IR, the water content of brain tissue was significantly increased. After 6 hours of IR, pallid infarct area could be seen, which was significantly different from that of sham group. The morphology of neurons was normal in sham group, but obvious autophagy was observed in IR group. After immunohistochemical staining, only a small number of Beclin-1 positive cells were found in the control group, but the expression of IR increased at different time points, especially in the IR 3 h and IR 24 h groups. Western blot analysis of Beclin-1 also showed a consistent trend of expression. Immunohistochemistry and Western blotting showed that the expression of ATG7, ATG3 and LC3 was consistent with that of Beclin-1. Conclusion Beclin-1 ATG7 ATG3 + LC3 plays an important role in regulating autophagy in cerebral ischemia-reperfusion injury.
【學(xué)位授予單位】：錦州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R743.3

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本文編號(hào)：2188755