【摘要】：磷酸甘露酶(PMM)是由manB基因編碼的廣泛存在于真核生物中的蛋白酶,在糖代謝過程中磷酸-6-甘露糖可在磷酸甘露酶的作用下轉(zhuǎn)化為磷酸-1-甘露糖,與細(xì)胞的初級代謝過程及次級代謝產(chǎn)物的合成過程密切相關(guān),可通過對刺糖多孢菌中與初級代謝途徑相關(guān)的基因進(jìn)行分析改造,促使多殺菌素的合成顯著提高。本研究在刺糖多孢菌基因組中克隆了磷酸甘露酶編碼基因manB的部分片段,將其與穿梭載體pOJ260連接,構(gòu)建了阻斷型載體pOJ260-manB。通過接合轉(zhuǎn)移將其導(dǎo)入刺糖多孢菌野生菌中,獲得刺糖多孢菌突變菌株S.spinosa-△manB。將突變菌株接種至不同培養(yǎng)基,觀察突變菌株與野生菌株的孢子形成情況,發(fā)現(xiàn)突變菌株的孢子萌發(fā)有所提前,且孢子產(chǎn)生量比野生菌略多;在HPLC上檢測多殺菌素的產(chǎn)量發(fā)現(xiàn)突變菌株的產(chǎn)量相對于野生菌株提高了180%,這說明manB基因?qū)Υ烫嵌噫呔纳L發(fā)育有一定的影響,并對調(diào)控多殺菌素的合成具有重要作用。
[Abstract]:Phosphomannase (PMM) is a protease encoded by manB gene in eukaryotes. In the process of glucose metabolism, phosphoric acid -6-mannose can be transformed into phosphate-1-mannose by the action of phosphomanase. It is closely related to the primary metabolic process of cells and the synthesis of secondary metabolites, which can be improved significantly by the analysis and modification of the genes related to primary metabolic pathway in polyspora spp. In this study, a partial fragment of phosphomannase encoding gene manB was cloned from the genome of Polysporium spp., and ligated with the shuttle vector pOJ260, the blocking vector pOJ260-man Bwas constructed. The mutant S.spinosa- manb was obtained by conjugation transfer. The spore formation of mutant strain and wild strain was observed by inoculating the mutant strain into different culture medium. It was found that the spore germination of mutant strain was earlier than that of wild strain, and the spore production of mutant strain was a little more than that of wild strain. The yield of the mutant strain was detected on HPLC. The yield of the mutant strain was increased by 180% compared with that of the wild strain, which indicated that the manB gene had a certain effect on the growth and development of polysporaria spp, and played an important role in regulating the synthesis of the bactericosporin.
【作者單位】： 湖南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/微生物分子生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地;
【基金】：國家國際合作重點(diǎn)項目(2011DFA32610) 國家“973”計劃(2011CB7221301) 國家“863”計劃(2011AA10A203) 湖南省協(xié)同創(chuàng)新中心項目(20134486)
【分類號】：TQ920.1;TQ450.1

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本文編號：2183434