發(fā)布時間：2018-08-09 15:19

【摘要】：ATM(mutated in Ataxia-Telangiectasia)是一個重要的表達絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶的基因,在DNA損傷與修復中發(fā)揮重要作用。DNA雙鏈斷裂會引起ATM的激活,從而引發(fā)下游一系列損傷修復反應。此外,染色體的高度動態(tài)變化也會激活ATM,iPS細胞誘導過程中染色體會發(fā)生巨大變化和高度修飾,但很少有研究報道ATM基因在重編程過程中的作用。本研究利用基因敲減技術分析了一些參與細胞代謝與生命活動的蛋白酶與蛋白激酶對于體細胞重編程的影響。結果顯示,除chuk基因外,敲減其他磷酸化相關基因后iPS細胞的誘導效率均有所提高。其中,敲減ATM不但提高iPS誘導效率,同時獲得的iPS克隆折光性很好,邊界清楚,且形成的轉分化細胞很少,iPS克隆非常均一。進一步分析顯示,隨著敲減ATM比例的增高,重編程的效率降低,且生成的克隆內源性Oct4未被激活,不能繼續(xù)培養(yǎng)傳代,而低敲減ATM的克隆經檢測重編程完整,多能性基因表達正常。此外,敲減ATM后,抑制P53和H2AX的磷酸化,同時發(fā)現(xiàn)敲減ATM后,細胞自噬相關蛋白LC3被激活,自噬在重編程過程中也發(fā)揮著重要作用。最終我們得出結論,適當敲減ATM會通過降低P53-pi和1γH2AX的水平而提高重編程的效率。
[Abstract]:ATM (mutated in Ataxia-Telangiectasia) is an important gene expressing serine-threonine protein kinase. It plays an important role in DNA damage and repair. DNA double strand breaks can activate ATM and induce a series of downstream damage and repair reactions. In addition, the highly dynamic changes of chromosomes also activate the induction of ATMI-PS cells. However, there are few studies on the role of ATM gene in the process of reprogramming. In this study, the effects of protease and protein kinase involved in cell metabolism and life activity on somatic cell reprogramming were analyzed by gene knockout technique. The results showed that the induction efficiency of iPS cells was increased after knockout of other phosphorylation related genes except chuk gene. Knockout ATM not only improved the induction efficiency of iPS, but also obtained iPS clones with good refractive index and clear boundary. Further analysis showed that with the increase of the proportion of knockout ATM, the efficiency of reprogramming was decreased, and the cloned endogenous Oct4 was not activated and could not be cultured and subcultured, while the clone of low knock down ATM was tested and reprogrammed completely. The expression of pluripotent genes is normal. In addition, the phosphorylation of p53 and H2AX was inhibited after knockout of ATM. It was also found that after knockout ATM, the autophagy protein LC3 was activated, and autophagy also played an important role in the process of reprogramming. Finally, we conclude that proper tapping of ATM can improve the efficiency of reprogramming by lowering the levels of P53-pi and 1 緯 H2AX.
【學位授予單位】：內蒙古大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：Q23

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本文編號：2174503