【摘要】：為了探究花鰻鱺(Anguila marmorata)AQP3基因在不同鹽度下的表達(dá)規(guī)律,利用RACE技術(shù)克隆了花鰻鱺AQP3基因c DNA全長序列,并進(jìn)行了生物信息學(xué)分析;通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-q PCR),檢測了花鰻鱺AQP3在9個(gè)組織中的分布及鹽度脅迫后鰓、腎、腸組織在0、6、12、24 h和3、5、10 d的表達(dá)情況。結(jié)果顯示:花鰻鱺AQP3基因的c DNA全長為1299 bp,開放閱讀框(ORF)為891 bp,5’非編碼區(qū)(UTR)和3’非編碼區(qū)(UTR)分別為60 bp和348 bp,共編碼296個(gè)氨基酸,具有6段跨膜結(jié)構(gòu)域及2個(gè)NPA(天冬氨酸-脯氨酸-丙氨酸)保守結(jié)構(gòu)域。氨基酸多重序列比對結(jié)果顯示,花鰻鱺AQP3基因與其同屬的歐洲鰻鱺(Anguilla anguilla)、日本鰻鱺(Anguilla japonica)同源性分別高達(dá)97.0%和96.0%。RT-q PCR檢測發(fā)現(xiàn),AQP3基因在鰓組織中表達(dá)量最高,而在脾臟中表達(dá)量最低;在咸淡水(鹽度10)和海水(鹽度25)組中,鰓組織的AQP3基因表達(dá)水平呈下降趨勢,且在各時(shí)段均顯著下調(diào);腎組織的AQP3表達(dá)水平在咸淡水(除24 h外)和海水(除6 h外)組中也顯著下調(diào);腸組織的AQP3表達(dá)水平在咸淡水組中顯著上調(diào),而在海水組中則顯著下調(diào)。研究表明,花鰻鱺AQP3的mRNA表達(dá)量在應(yīng)對不同鹽度環(huán)境時(shí)呈現(xiàn)不同的表達(dá)變化模式,這將為深入揭示花鰻鱺適應(yīng)鹽度變化的分子調(diào)控機(jī)理奠定理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to investigate the expression of (Anguila marmorata) AQP3 gene in Anguilla japonica under different salinity, the full-length sequence of c DNA of AQP3 gene of Anguilla Anguilla japonica was cloned by RACE technique and analyzed by bioinformatics. The distribution of AQP3 in 9 tissues and the expression of AQP3 in the Gill, kidney and intestine of Anguilla japonica were detected by real-time fluorescence quantitative PCR (RT-q PCR),). The results showed that the total length of c DNA of the AQP3 gene of Anguilla japonica was 1299 BP, the open reading frame (ORF) was 891 BP (UTR) and the 3'noncoding region (UTR) was 60 BP and 348 BP, respectively, encoding 296 amino acids. There are six transmembrane domains and two NPA conserved domains. The results of amino acid multiple sequence alignment showed that the homology of the AQP3 gene of Anguilla japonica was 97.0% with that of the European eel (Anguilla anguilla), of the same genus, and the highest expression of (Anguilla japonica) gene was found in the Gill tissue of Japanese Anguilla japonica and the lowest in the spleen by 96.0%.RT-q PCR test. In saltwater (salinity 10) and seawater (salinity 25) groups, the expression of AQP3 gene in Gill tissue showed a decreasing trend, and was significantly down-regulated at each stage. The expression of AQP3 in renal tissues was also significantly down-regulated in saline and fresh water (except 24 h) and seawater (except 6 h) groups, while the expression of AQP3 in intestinal tissues was significantly up-regulated in saline and fresh water groups, but significantly down-regulated in seawater groups. The results showed that the expression of mRNA in AQP3 of Anguilla japonica showed different expression patterns in different salinity environments, which would lay a theoretical foundation for further understanding the molecular regulation mechanism of adaptation to salinity change in Anguilla Anguilla japonica.
【作者單位】： 南京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院江蘇省生物多樣性與生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：江蘇省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(BK20141450)
【分類號】：S917.4

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