【摘要】：該文旨在探討慢病毒介導(dǎo)的沉默信息調(diào)節(jié)因子6(silent information regulator 6,SIRT6)基因沉默對(duì)人肝癌細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制。逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)和Western blot分別檢測(cè)人肝癌細(xì)胞系(SK-Hep-1、Huh-7、PLC/PRF/5、Hep G2)和永生化肝細(xì)胞系(MIHA)中SIRT6基因的表達(dá)水平;利用慢病毒介導(dǎo)的sh RNA干擾技術(shù)靶向沉默SIRT6的表達(dá),并通過RT-PCR和Western blot驗(yàn)證其沉默效率;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SIRT6基因沉默對(duì)人肝癌細(xì)胞凋亡的影響,進(jìn)一步應(yīng)用RT-PCR和Western blot檢測(cè)SIRT6基因沉默對(duì)凋亡抑制蛋白基因(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族m RNA和蛋白質(zhì)水平的影響;最后,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析X連鎖凋亡抑制蛋白基因(X-linked inhibitor of apoptosis protein gene,XIAP)在SIRT6基因沉默誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞凋亡中的作用。結(jié)果顯示,SIRT6基因在人肝癌細(xì)胞系中表達(dá)上調(diào);慢病毒介導(dǎo)的sh RNA能抑制人肝癌細(xì)胞中SIRT6基因的表達(dá);沉默SIRT6基因的表達(dá)能誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡,并降低XIAP的m RNA和蛋白質(zhì)水平;過表達(dá)XIAP能逆轉(zhuǎn)SIRT6基因沉默所誘導(dǎo)的人肝癌細(xì)胞凋亡。該研究結(jié)果提示,SIRT6基因沉默可能通過調(diào)節(jié)XIAP的表達(dá)從而誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:The aim of this study was to investigate the effect of lentivirus-mediated silencing signal regulator 6 (silent information regulator 6 sir6) gene silencing on apoptosis of human hepatoma cells and its mechanism. Reverse transcriptase PCR (RT-PCR) and Western blot were used to detect the expression of SIRT6 gene in human hepatoma cell line (SK-Hep-1 Huh-7Hep G2) and immortalized liver cell line (MIHA) respectively, and the expression of SIRT6 gene was targeted by lentivirus-mediated sh RNA interference technique, and its silencing efficiency was verified by RT-PCR and Western blot. Flow cytometry was used to detect the effect of SIRT6 gene silencing on apoptosis of human hepatoma cells, and RT-PCR and Western blot were used to detect the effect of SIRT6 gene silencing on the level of m RNA and protein of (inhibitor of apoptosis proteinsin IAPs family. The role of X-linked inhibitor of apoptosis protein gene in apoptosis induced by SIRT6 gene silencing was analyzed by flow cytometry. The results showed that the expression of SIRT6 gene was up-regulated in human hepatoma cell line, lentivirus-mediated sh RNA could inhibit the expression of SIRT6 gene in human hepatoma cell line, and silencing the expression of SIRT6 gene could induce apoptosis and decrease the level of m RNA and protein of XIAP. Overexpression of XIAP can reverse apoptosis induced by SIRT6 gene silencing. These results suggest that silencing of SIRT6 gene may induce apoptosis of human hepatoma cells by regulating the expression of XIAP.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)感染性疾病分子生物學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(批準(zhǔn)號(hào):81472271,81270559)資助的課題~~
【分類號(hào)】：R735.7

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